最终生物技术与人类健康.ppt

;; ELISA技术; 将酶与抗体(原)交联形成酶 — 抗体(原)复合物，抗原与抗体的特异结合及酶将无色底物催化成有色底物，根据底物颜色的有无及颜色的深浅判断阴性或阳性反应及反应强度，所以可以用于定性或定量分析。 常用的酶有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酯酶(AP)或脲酶等。。; 将待测样品结合在固体支持物上。常用的固体支持物是96孔的微量滴定板。 加入一些惰性蛋白质 ; ◆若样品中不含目标分子，一抗上没有结合上目标分子，那么第一次冲洗时一抗全部被洗去，二抗也就无法结合，底物就会保持无色。 ◆样品中含有目标分子，一抗能特异的与之结合，二抗结合到一抗上，二抗上连带着的酶就会使无色底物变成有色物质。;常用的ELISA诊断技术;;测定抗原的双抗体夹心ELISA 病原体及其大分子进入机体后都可能成为一种抗原，通过检测机体的抗原来判断机体是否感染了相应的病原体。 ;测定抗原的双抗体夹心ELISA ;; ELISA检验必须首先制备大量的抗原 传统的抗原制备方法本身存在很大的危险，因为制造抗原时，要大量培养病原体，如果这些病原体逸出，将会造成很大危害； 其次，产品的质量难以控制，难以标准化，从而导致各批次产品质量的差异； 再次，生产费用高，特别是那些体外不能培养的病原体更是如此。 基因工程抗原可以克服上述的不足。 基因工程抗原：是将抗原基因克隆在细菌或真核细胞表达系统中，由这些表达系统生产大量的抗原 ; 多克隆抗体与单克隆抗体; 单克隆抗体 利用细胞融合技术，在体外大量培养融合细胞，由融合细胞产生大量的抗体。单克隆抗体只识别某一特定的抗原决定簇，它具有特异性强、成分均一、灵敏度高、产量大、容易标准化生产等优点而明显优于多克隆抗体。 在ELISA法中利用单克隆抗体极大地提高了检测结果的准确性。; 单克隆抗体应用： 1.鉴定微生物病原体 2.确定激素水平 3.检测肿瘤相关蛋白 4.检验血液中的药物含量 5.其他领域的应用 ; 1978年Kan和Dozy首先应用羊水细胞DNA限制性片段长度多态性（RFLP）做镰状形细胞贫血症的产前诊断，从而开创了DNA诊断的新技术。20多年来，DNA诊断技术取得了飞速的发展，建立了多种多样的检测方法，这些检测方法可以用于遗传性疾病、肿瘤、传染性疾病等多种疾病的诊断。; DNA诊断技术; DNA探针杂交技术; DNA探针杂交技术; 聚合酶链式反应技术是一项体外扩增特异DNA片段的技术。 ; 以传染因子的特异因子的特异DNA序列作为目标DNA片段。以这段目标DNA设计引物，对待测样品进行PCR扩增。 ◆检测出相应的扩增带，为阳性。 ◆检测不出相应的扩增带，为阴性。 特点：灵敏度极高，可以检测极微量的病原体。但如果操作不当很容易产生假阳性反应。 ; PCR-RFLP技术 PCR－ASO技术 PCR-ELISA技术 PCR-SSCP技术 PCR-DGGE技术 LCR技术 RFLP-探针杂交技术; 限制性片段长度多态性（RFLP）是指由于碱基的改变导致DNA上的某一限制性内切核酸酶水解位点增加或减少。当这种DNA用内切酶水解时，产生的DNA片段数将相应的增加或减少，并且其DNA片段的分子质量也发生相应的改变，这种DNA片段的变化就称为限制性片段长度多态性。; RFLP分析技术是分子生物学的重要分析方法之一，用于检测DNA序列多态性。 PCR-RFLP 是将PCR 技术、RFLP 分析与电泳方法联合应用，先将待测的靶DNA 片段进行复制扩增，然后应用DNA 限制性内切酶对扩增产物进行酶切，最后经电泳分析靶DNA 片段是否被切割而分型。 ; 许多遗传性疾病就是由于DNA上碱基的改变引起的。如果这种改变正好增加或减少了DNA限制性内切核酸酶的水解位点,那么就可以用PCR技术先扩增包括这一突变位置在内的DNA片段，获得大量的DNA片段后通过RFLP方法进行分析。;26;ASO称为等位基因寡核苷酸。 PCR-ASO的