第3节蛋白质一级结构(4学时)资料.ppt

蛋白质的结构（structure of protein）;第3节 蛋白质的一级结构（primary structure of proteins） ;蛋白质一级结构的概念（concept of proteins’ primary structure)） ;多肽链中氨基酸之间的连接键主要是肽键（peptide bonde），另外有的还有二硫键(disulfide bond) ，有链间和链内二硫键之分。 二硫键起着稳定空间结构的作用，二硫键越多越称稳定，而且往往与生物活性有关。 ;链间二硫键、链内二硫键;;2 蛋白质一级结构的例子—胰岛素（insulin）;分泌不足时，组织中的糖利用发生障碍，肝糖原分解加速，并从尿中排而患糖尿病，因此，临床上胰岛素可用来治疗糖尿病。 胰岛素的一级结构是由英国的Sanger(桑格)等于1953年首先完成的，花费了10年时间，这是蛋白质化学研究史上一项重大成就。;HGly-Ile-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Ala-Ser-Val-Cys-Ser-Leu-Tyr-Gln-Leu-Glu-Asn-Tyr-Cys-AsnOH;结构特点;蛋白质一级结构研究的意义;核??核酸酶的一级结构;3 蛋白质一级结构的测定（主要内容）;3.1 一级结构测定的一般步骤(或策略);6）裂解多肽链成较小片段； 7）测定各肽段的氨基酸序列； 8）确定肽段在多肽链中的次序，即重建完整多肽链的一级结构； 9）确定多肽链中二硫键的位置。 ;3.2 几个重要的测定步骤（内容）;3.2.1 肽链末端的测定:N-末端;C-末端;①二硝基氟苯（DNFB，或Sanger）法;②丹磺酰氯(DNS)法;苯异硫氰酸酯(PITC，或Edman降解)法;氨肽酶（amino peptidase）法;①肼解法;肼解反应;②还原法;③羧肽酶（carboxypeptidase）法;羧肽酶（carboxypeptidase）法图示;3.2.2 肽链的拆开和分离(-S-S-的断裂);;还原法打开二硫键;3.2.3 氨基酸组成的分析测定;3.2.4 肽链的部分裂解;肽链的部分裂解－酶法;3.2.5 肽段氨基酸序列的测定;3.2.6 肽段在多肽链中次序的确定－重叠肽法;例如：10个氨基酸残基的肽链用A/B两种方法的到两套肽段 方法A 方法B N-末端残基A，C-末端残基S 1、AF AFGR 2、GRLY LYKW 3、KW WHS 4、HS 10肽的顺序：AFGRLYKWHS;3.2.7 二硫键位置的确定－对角线电泳;③滤纸旋转900解在与第一向完全相同的条件下进行第二向电泳。 肽斑用茚三酮显色确定，大多数肽段迁移率不变，并位于滤纸的一条对角线上，只有磺基丙氨酸的肽段偏离了对解线。 ④将每对含磺基丙氨酸的肽段取下，进行氨基酸序列分析，然后与多肽链的氨基酸序列比较，即可确定二硫键的位置。;对角线电泳图示;3.3 蛋白质序列数据库（database or databank ）;美国政府支持的Gen Bank(Gene Sequence Data Bank,基因序列数据库) 欧洲的EMBL（European Molecular Biology Laboratory Data Bank,欧洲分子生物学实验室数据库） ;4 蛋白质的一级结构与功能的关系;一级结构似，蛋白质空间构象和功能也相似，例如：不同哺乳类动物的胰岛素分子。 一级结构不同，蛋白质功能不同。 ;4.1同源蛋白质的物种差异与生物进化;几个名词;同源蛋白质的氨基酸序列中有许多位置的氨基酸残基对所有已研究过的物种来说都是相同的，这样的aa残基称为不变残基（invariant residue），对生物功能起决定作用； 但其他位置的氨基酸残基对不同物种有相当大的变化，这样的残基称为可变残基（variable resdue），残基的变化不影响蛋白质的功能，并且能提供物种之间亲缘关系远近的信息。;2）细胞色素C;不同物种间细胞色素C序列间氨基酸差异数目的比较;3）系统树;系统树;;4.2蛋白质的激活;凝血酶原→凝血酶;凝血酶作用—使血纤蛋白原裂解;血液凝固的激活过程;2）胰岛素分泌：前胰岛素原→胰岛素原→胰岛素;3）分子病;如：镰刀型贫血病血红蛋白 由此引起三级结构多一疏水键，四级结构发生线性缔合，导致红细胞发生溶血，不易透过毛细血管，血流速度减慢。;注意