第四章工业发酵灭菌资料.ppt

工业发酵灭菌; 课程目标 1、理解工业发酵常用灭菌方法的基本原理和适用范围 2、掌握工业发酵培养基和发酵罐设备的灭菌工艺的选择 3、掌握无菌空气制备的基本知识和典型工艺流程; 概述;几个概念： 消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、环境中的一切病原微生物（表面）一般只能杀死营养细胞而不能杀死细菌芽孢。 灭菌：用物理或化学方法杀死或除去所有微生物 除菌：采用过滤方法除去空气或液体中的微生物或孢子。 ; 第一节 灭菌方法;1、热灭菌法： 原理：加热使微生物蛋白质变性 包括：干热灭菌法、湿热灭菌法 （1 ） 干热灭菌法 火焰灭菌：采用火焰直接杀死微生物。如接种针、接种环等的灭菌。该方法应用范围有限。 ;干热灭菌： 概念：在红外线或电热作用下，在设备内加热，主要用于保持干燥的物料、器具等灭菌。 方法：常用在烘箱内，烘箱内的温度160~170度，维持1~2小时 ;注意：不能超过180度、灭菌物体不能放得太紧、降温时缓缓进行、温度降到80度以下时才能开烘箱门。 原理：氧化作用 缺点：干热的穿透力弱，微生物对干热的耐受力比湿热强很多，需要的灭菌温度相比较要高，时间要长。;（2 ） 湿热灭菌 原理：借助蒸汽释放的热，使微生物细胞中的蛋白质、核酸、酶分子内的化学键，特别是氢键受到破坏，引起不可逆的变性，使微生物死亡。 热阻：微生物在某一种条件下的致死时间。 适用范围；广泛用于生产设备、培养基的灭菌。 ;同温下相对于干热灭菌，杀菌效力更强。 原因： （1）湿热条件下，菌体吸收水分，蛋白质更易凝固。原因：含水量加大，所需凝固温度降低。 （2）湿热蒸汽的穿透力大 （3）湿热的蒸汽有潜热存在 湿热灭菌方法分为：煮沸灭菌法、巴氏消毒法、间歇式、高压蒸汽灭菌法 ;煮沸法： 将要消毒的物品放入水中煮沸（100度）。 煮沸时间： 15—20分，杀死微生物营养细胞 1—2h，杀死芽孢。加碳酸钠或石炭酸(0.5%) 对象：适用食品或器材的消毒;巴氏消毒法： 待消毒的物体在60～62℃加热30min或在70℃加热15min，杀死病原菌和一部分微生物。 对象：牛奶、啤酒、黄酒、酱油等食品 特点：不损害某些食品的营养价值和色香味 举例：啤酒的灭菌;间歇灭菌法： 采用反复几次常压蒸汽灭菌法。杀死微生物营养体和芽孢。 具体方法：待灭菌物品，放入灭菌器中加热到100℃，维持30～60min ，取出，冷却，37℃恒温箱中培养1小时，次日同法处理。共三次 对象：不宜高压灭菌的物质。如糖类明胶牛奶培养基等 ;高压蒸汽灭菌： 主要使用密闭的高压蒸汽灭菌锅。使用广泛。 方法：压力0.1MPa，温度121度，维持15—30min. 注意事项：灭菌完毕，缓缓减压 ;总结优缺点： 湿热灭菌优点：蒸汽来源容易、蒸汽穿透力强，灭菌彻底、蒸汽有很大潜热、可调节压强 湿热灭菌的缺点：设备费用高，不能用于怕受潮的物料的灭菌。 ;2 辐射灭菌 辐射灭菌：利用高能量的电磁辐射和微粒辐射来杀死微生物。紫外线最为常用。 适用范围：接种室，超净工作台、无菌培养室及物质表面。 注意事项：紫外线穿透率力底，只能用于表面灭菌。30W紫外线灯照射30min ，可取到杀菌效果。一般和化学试剂合用 ;紫外线灭菌机理： 使微生物的DNA链断裂，破坏核糖和磷酸的连接 引起DNA分子内或分子间氢键断裂，使微生物死亡; 化学灭菌法 化学灭菌法：化学药品直接作用于微生物将其杀死的方法。 适用范围：生产车间、无菌室、实验室、接种前的小型器具及手的消毒。 使用方法：浸泡、添加、擦拭、喷洒等 ; 化学灭菌机理 化学物质容易与微生物细胞中的某种成分产生化学反应。如蛋白质变性、酶类失活、破坏细胞膜通透性，杀灭微生物。 注：不适合培养基的灭菌，适用于局部空间或器械的灭菌。 例：P46 常用化学灭菌剂，共7种;第二节 培养基和发酵设备的灭菌;2、影响培养基灭菌效果的因素 （1）培养基的成分 油脂、糖类、蛋白质、低质量分数（1%--2%）NaCl溶液 （2）pH值： pH为6—8，微生物最耐热， pH小于6，氢离子易渗入微生物细胞内，改变细胞生理反应促使其死亡。 pH愈低，灭菌所需时间愈短。 （3）培养基中的颗粒。颗粒大，灭菌易；颗粒小，灭菌难 （4）泡沫：泡沫中的空气形成隔热层，传热困难。难以杀死微生物。;二、培养基的灭菌方法 （一）分批灭菌 是在每批培养基全部流入发酵罐后，就在罐内通入蒸汽，加热至灭菌温度后，维持一定时间，再冷却到接种温度。实罐灭菌时，发酵罐与培养基一起灭菌。 特点：不需要其他附属设备，操作简单，为常用的灭菌方法 缺点：加热和冷却时间长，营养随时间增长而降低，发酵罐利