第九章 常用仪器分析方法简介.pptVIP

常用仪器分析方法简介;;第一节 光度分析法;一、紫外－可见分光光度法 Ultraviolet and visible Spectrophotometry;● 电磁波谱和光谱;光的性质与物质的颜色;单色光;● 溶液对光的吸收;用不同波长的单色光作入射光，按波长由短到长的顺序依次通过同一溶液，测得与各波长相对应的吸光度A ，以A为纵坐标，波长?为横坐标作图，所得曲线即为该溶液的吸收曲线（吸收光谱） ;KMnO4溶液的光吸收曲线 (cKMnO4: abcd) ;定性依据 A455/A340 ≥ 1.5 A455/A483 = 1.14~1.18; 分光光度法是根据物质的吸收光谱和光的吸收定律，对物质进行定量、定性分析的一种仪器分析方法。;;朗伯定律(1760) A=lg(I0/It)=k1b;● 朗伯-比尔定律(Lambert-Beer定律);摩尔吸光系数ε的讨论 （1）吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数； （2）不随浓度c和光程长度b的改变而改变。在温度和波长等条件一定时，ε仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关； （3）可作为定性鉴定的参数；;（4）同一吸收物质在不同波长下的ε值是不同的。在最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数，常以εmax表示。εmax表明了该吸收物质最大限度的吸光能力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度。 ;（5）εmax越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。 ε105： 超高灵敏 ε= (6～10）×104 ：高灵敏 ε= (2～6）×104 ：中等灵敏 ε 2×104：不灵敏 （6）ε在数值上等于浓度为1mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。;[例题] 有一含铁浓度为1mg/L的溶液，以邻二氮菲法测定铁，比色皿厚度为2cm ，在508nm测得吸光度为0.380，计算摩尔吸光系数。;● 分光光度计的构成;光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够的光强度,稳定。 热光源：钨灯，碘钨灯(350～2500nm) 可见光 气体放电光源：氢灯，氘灯(150～400nm) 紫外区;单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。 棱镜:玻璃350～3200nm, 石英185～4000nm 光栅:波长范围宽, 色散均匀,分辨性能好, 使用方便;光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。波长范围宽, 色散均匀,分辨性能好, 使用方便;吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。 可见光区：光学玻璃池 紫外区：石英池;检测器：利用光电效应，将光信号转换成电信号。 光电管 光电倍增管;指示器：低档仪器：刻度显示 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录;（1）按波长类别和光束类别分类; (2) 按工作波长范围分类;（一）测定条件的选择;1、显色剂的选择条件;2、影响显色反应的因素; 控制溶液的酸度; 控制显色温度和时间;分析条件的选择;2、控制适当的吸光度范围;两式相除得： dc/c = （ 0.434 / TlgT ）dT 以有限值表示可得： Δc/c =（0.434 / TlgT）ΔT 浓度测量值的相对误差（Δc/c）不仅与仪器的透光度误差ΔT 有关，而且与其透光度读数 T 的值也有关。;最佳读数范围与最佳值 设 ΔT =1%，则可绘出溶液浓度相对误差Δc/c与其透光度T 的关系曲线。如图所示：;3、选择适当的参比溶液;测定实例：铁含量的计算 1．标准曲线的绘制 吸取250mg/L铁标准溶液0.00、2.0、4.0、8.0、16.00ml，分别注入50ml容量瓶中，加盐酸羟胺，加邻二氮菲，定容，测定吸光度，绘制标准曲线。 2．样品的测定 试样经??理，配成在具有线性关系范围内的质量浓度，取1.00ml试样溶液，加盐酸羟胺，加邻二氮菲，定容，测定吸光度。 3．铁含量的计算 从测定的吸光度值，在标准曲线上找出样品的质量浓度，根据样品溶液稀释的倍数，求出样品中铁的含量。;测定实例1：紫外吸收法测定蛋白质含量: 由于蛋白质中酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸含有共轭双键，多数蛋白质在280nm波长处有最大吸收，一定范围内，蛋白质溶液的光吸收值与其含量成正比，可用于测定蛋白质的含量。 准确性较差（1）若蛋白不含酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸，则无