微生物的培养与应用导论.ppt

专题二 微生物培养与应用;病毒 原核微生物 真核微生物 ;病毒几乎可以感染所有的细胞生物，并具有宿主特异性;图1-1 常见的三种细菌典型形态 A.球菌 B.杆菌 C.弧菌;真核微生物;蕈菌广泛分布于地球各处，在森林落叶地更为丰富。;;课题1 微生物的实验室培养;㈠ 培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 1.培养基的类型和用途 （1）按物理性质来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定、保藏等。 （2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。;分离金黄色葡萄球菌; 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;; 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 ;1．培养基的类型及用途;2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 (参考教材附录内容P83) 3.培养基的成分和条件 （1）成分：一般都含有水、无机盐、碳源、氮源。 碳源：凡是能为微生物提供生长繁殖所需碳元素的营养物质。 氮源：凡是能为微生物提供所需氮元素的营养物质。 （2）培养条件：pH、特殊营养物质、氧气、二氧化碳、渗透压等。 特殊营养物质：如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成 的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) pH：细菌pH为6.5–7.5; 放线菌pH为7.5–8.5;真菌;pH5.0–6.0 ;;菌落;酵母菌;芽孢： 有些细菌在一定的条件下，细胞里形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.;（二）无菌技术（成功关键） 1、概念：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 2、消毒：指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子） 3、灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 4、归纳实验室常用的消毒和灭菌方法(阅读P15）;小结消毒;小结灭菌;1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？; 高浓度酒精能将细菌表面的蛋白质凝固，并形成一层保护膜，阻止酒精进入细菌体内，因而不能将细菌彻底杀死。 酒精浓度低于70%，虽可进入细菌体内，但不能将细菌彻底杀死。只有70%-75%的酒精即能顺利地进入到细菌体内，又能有效地将细菌体内的蛋白质凝固，因而可彻底杀死细菌。;（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基;①倒平板的温度一般在50℃左右适宜 （温度过高会烫手，过低培养基又会凝固） ②平板需倒置 （这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染）; 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？;3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？;1、接种概念：; 纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项： (1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 (2)方法：平板划线法、稀释涂布平板法。 ①平板划线法：阅读P18 平板划线法中细菌的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。;平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况;平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况;问题讨论P18; 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;②稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 稀释涂布平板法操作过程分两个步骤： 系列稀释操作 涂布平板操作;系列稀释操作;涂布平板操作（阅读19）;稀释涂布平板法获取的菌落;问题讨论平P19; （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的