酶工程第二章xin资料.ppt

为什么主要选用微生物作为酶生产的来源？;为什么选用微生物作为酶生产的来源？ （1）种类多，易筛选到所需的产酶菌 （2）繁殖快 （3）易培养 （4）代谢能力强，产酶量高;第二节 常用的产酶微生物;常用的产酶微生物; 产酶微生物必须具备的几个条件 1)酶的产量高 高产菌种如何得到？ 若菌种发生退化如何处理？ 2)容易培养和管理: 生长条件、成本 3)产酶稳定性好： 稳定生长、产酶。 不容易退化 4)有利酶的分离纯化：什么样的酶最利分离纯化？ 5)安全可靠、无毒性：生物安全性问题;微生物所产酶的类型 1.胞外酶：大多是水解酶（如淀粉酶、蛋白酶、 纤维素酶、果胶酶），是微生物为了利用环境中的大分子而释放到细胞外的，即使胞外浓度很高，胞内也能维持较低水平，受到的调节控制少。 2.胞内酶：指合成后仍留在细胞内发挥作用的酶，酶活性和浓度受到中间产物和终产物的调控。;细菌：这些微生物具体所合成的产酶，见教材 放线菌： 霉菌: 黑曲霉、红曲霉、米曲霉、青霉、木霉、根霉、毛霉 酵母： 高产酶的菌种是如何筛选得到的？; 产酶微生物的分离和筛选 1)样品的采集:从富含该酶作用底物的场所采集样品 2)富集培养: 投其所好，取其所抗 3)分离获得微生物的纯培养（pure culture）。 4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。 5)复筛：选出产酶水平相对较高的菌株，以质为主。 ; ?-淀粉酶的筛选 ;产酶微生物优良菌种的选育 遗传育种： 如何进行遗传育种？ ;产酶微生物优良菌种的选育 遗传育种： 诱变育种 原生质体融合育种 基因工程育种 ;酶的发酵生产根据细胞培养方式的不同，可分为 固体培养发酵、 液体深层发酵、(应用最为广泛） 固定化细胞或固定化原生质体发酵; 微生物发酵产酶方法 1.固体培养:特别适合于霉菌培养 2.液体培养:目前酶发酵生产的主要方式 3.固定化细胞 :需要特殊的固定化细胞反应器 ;各种规模的液体深层发酵罐;Laboratory Process DevelopmentFermentor Experiments;第三节 发酵工艺条件及控制;酶发酵生产的一般工艺流程 ;一、细胞活化与扩大培养：; 为了保证发酵时有足够数量的优质细胞，活化了的细胞一般要经过一级至数级的扩大培养。用于细胞扩大培养的培养基称为种子培养基。;二、培养基的配制；培养基的概念; 在酶制剂生产中菌种的产酶性能虽然是决定发酵效果的重要因素，但是发酵的工艺条件对产酶的影响也是十分明显的。除培养基组分外，其它如pH、温度、通气、搅拌、泡沫、湿度、诱导剂和阻遏剂等，它们相互联系，只有配合恰当，才能得到良好的效果。;1、各类微生物生长繁殖时对pH值要求不同。;培养基的pH值在发酵过程中往往升高或降低这种变化与细胞特性有关，也与培养基组分密切相关。含糖量高的培养基，由于糖代谢产生有机酸，会使培养基的pH值向酸性方向移动；此时培养基中成分C/N值增高；相反地，含蛋白质、氨基酸较多的培养基，经代谢产生较多的胺类物质，使pH值向碱性方向移动；此时C/N比降低。; pH值还与通气的量，糖和脂肪的氧化有关，如果通氧不足，糖和脂肪氧化不完全，则会产生如有机酸类的中间产物，这样培养基的pH就出现不同程度降低，总之各种反应都影响pH的改变，由于各个时期内各种反应优势不同，发酵液的pH则相应地变动，根据pH的变动情况，常用作为发酵过程生产控制的依据之一。;5、pH值的调节可以通过调节培养基原始的pH，掌握原料的配比，保持一定的C/N比，或者添加缓冲剂，如发酵过程中加氨水，使发酵液具有一定缓冲能力，也可通过调节通气量来实现。;不同的细胞有不同的最适生长温度;4、此外细胞生长和发酵产酶过程中，由于细胞的新陈代谢作用，要不断放出热量，会使培养基的温度升高，（放热反应）。;5、温度控制的方法一般采用热水升温，冷水降温，故此在发酵罐中，均设计有足够的传热面积交换器装置，如排管、蛇管、夹套、喷淋管等。;1、在菌种培养时期，对通气时的要求各不相同，为了精确测定，现在普遍采用溶氧仪来测定培养液中溶解氧含量。;耗氧速率 Ko2=QO2·CC;培养液中溶解氧的量多少决定于在一定条件下氧气的溶解速度。;4、调节溶氧速率的方法：;（四）搅拌： 在上面提到可将气泡打碎，增加气液接触面积，加速溶氧速率。;常用消泡剂有：天然油类、醇类、脂肪酸类、胺类、酰胺类、金属皂类、聚硅氧烷、醚类等，其中以聚二甲基硅氧烷为最理想的消泡