新型磷脂酰肌醇3激酶抑制剂C96对多发性骨髓瘤治疗作用研究.pdf

新型磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂 C96 对多发性骨髓瘤治疗作用的研究 中文摘要 中文摘要 研究背景和目的：多发性骨髓瘤(Multiple myeloma, MM)是一种浆细胞异常 增生引起的恶性肿瘤，而磷脂酰肌醇-3-激酶( phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K) / 信号通路控制着 MM 的生长、增殖、迁移、血管生成等方面，是治疗 MM 的热 点靶向之一。在前期研究中，我们利用计算机辅助药物筛选结合生物学方法，筛 选出一种能够抑制 PI3K 生物活性的小分子抑制剂 C96，本论文中，我们将阐明 其对 MM 的实验性治疗作用，并揭示其相关机理。 研究内容： (1) 噻唑蓝（MTT）法检测 C96 对 MM 细胞增殖的影响。 (2) 流式细胞术检测 C96 对 MM 细胞凋亡率的影响；Western blotting 检测 C96 对凋亡相关蛋白的影响。 (3) Western blotting 检测 C96 对 Akt 磷酸化水平的影响；免疫荧光染色法检 测 p-AKT 蛋白的表达及定位；酶活性法分析 C96 对 PI3K 活性的影响。 (4) Western blotting 检测 C96 对 PI3K/AKT 信号通路相关蛋白的影响。 (5) 动物实验：构建骨髓瘤的裸鼠异种移植瘤模型，检测 C96 对裸鼠肿瘤体 积大小及裸鼠体重的影响，同时观察 C96 对裸鼠有无毒性作用。 研究结果： (1) C96 对多种 MM 细胞的增殖具有抑制作用。选用了 7 种 MM 细胞系，对 细胞存活和增殖状况的分析表明，C96 对这些细胞的增殖具有明显的抑制作用， 并呈剂量依赖性关系。 (2) C96 诱导 MM 细胞的凋亡。通过 Annexin V-FITC 和 PI 双染，流式细胞 仪检测凋亡细胞所占的比例，发现随着药物浓度的升高凋亡率显著增加。Western blotting 检测结果表明，C96 促进了 Caspase 3 的裂解激活，并活化了 PARP。另 外，它下调抗凋亡蛋白 Bcl-2 的表达，同时上调促凋亡蛋白 p53 的表达。 (3) C96 抑制了 PI3K/AKT 信号通路的激活。Western blotting 检测结果表明， C96 可以抑制 MM 细胞中 p-AKT 的表达，进而阻断 PI3K/AKT 信号通路的激活。 免疫荧光染色检测了 OPM2 细胞中 p-AKT 的表达和定位，同样证实 C96 对其有 抑制作用，并阻止 AKT 向细胞膜的聚集。同时 C96 的酶活力检测实验结果显示 I 中文摘要 新型磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂 C96 对多发性骨髓瘤治疗作用的研究 C96 具有抑制 PI3K 的能力。 (4) C96 抑制了 PI3K/AKT 信号通路下游信号 mTOR、p70S6K、4E-BP1 等蛋 白的磷酸化水平。 (5) C96 延缓裸鼠体内 MM 的生长。用人 MM 细胞株 JJN3 构建裸鼠体内骨 髓瘤的异种移植模型，通过 16 天连续灌胃给药，对其肿瘤体积大小和体重的监 测表明，C96 能显著抑制肿瘤的生长，而对其体重无明显影响。同时，Western blotting 检测结果表明 C96 也抑制了肿瘤组织中 AKT、mTOR 的激活。 结论：我们通过计算机辅助药物筛选与生物技术相结合的方法筛选出 PI3K 的抑制剂 C96，这种小分子抑制剂能够有效