中药防治鸡汞中毒机理研究.docx

中药防治鸡汞中毒机理研究 （技术路线） 1材料 1.1试验动物及样品 1.1.1汞矿周围采集的样品 分别在汞矿区附近杨家湾，张家坪等村庄采集土壤、水；萝卜、玉米、大米和白菜等蔬菜各500g；当地农户笼养的鸡、鸭各3只，猪、牛、羊分别取一头，采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉各500g。 1.1.2 试验性汞中毒动物 试验动物为200只脱温鸡苗，购于贵阳市花溪区三桥某禽苗批发公司。检疫并观察一周后投入实验。 1.2主要药物与试剂 中药：黄芪、甘草、茯苓、白茅根、白术、山药、蒲公英等购自贵州省贵阳市花溪区中医院 汞标准储备液（100μg/mL，国家标准物质中心） 硝酸（优级纯，含量 65.0-68.0%，国药集团化学试剂有限公司） 30%过氧化氢（优级纯，天津市东方化工厂） 氦气（青岛合利气体有限公司） 二甲苯 (重庆川东化工（集团）有限公司) 无水乙醇 (重庆川东化工（集团）有限公司) 苏??素 (武汉博士德生物工程公司) 多聚甲醛 (天津市同鑫化工厂) 中性树胶 (中杉金桥生物公司) 石蜡 (熔点：57-61℃，上海标本模型厂) SOD 超氧化物歧化酶（鼎国生物技术有限责任公司) GSH-PX 谷?胱?甘?肽?过?氧?化?物?酶?（鼎国生物技术有限责任公司) MDA 丙二醛（鼎国生物技术有限责任公司) AST 谷草转氨酶（鼎国生物技术有限责任公司) 1.3主要试验器材 SW-CJ-2FD双人单面净化工作台 (苏州净化设备有限公司) PE-6800VET全自动血细胞分析仪（深圳市普康电子有限公司） TGL-20M台式冷冻离心机（长沙湘仪贝克仪器仪表有限公司） Scanspeed微型台式离心机（丹麦Labogene公司） BS110S电子天平（德国SARTORIUS ） Leica RM2125切片机（德国徕卡公司） MDF-382E -80℃低温冰箱（SANYO公司） BCD-215KC F海尔冰箱（青岛海尔股份有限公司） OLYMPUS CH20BIMF200显微镜（日本OLYMPUS 光学有限公司） PHS-3S酸度计（上海虹益仪器仪表有限公司） 微波消解萃取仪 (上海新仪微波化学科技有限公司) ECH-1型电子控温加热板 (上海新仪微波化学科技有限公司) LD4-2A离心机（北京医用离心机厂） AFS-9130 双道原子荧光光度计（北京吉天仪器有限公司） Sartorius 电子天平（德国赛多利斯公司） ICP-MS电感耦合等离子体质谱仪(Inductively coupled plasma mass spectrometry)（北京吉天） 2方法 2.1汞矿周围环境及畜禽体内汞含量调查 2.1.1样品采集与处理 2.1.1.1土壤采集与处理 采集：土壤采用4分法则采集，每个样品从5m x 5m的正方形4个顶点和中心点共5处各采集1kg的表层土壤（0-20cm），均匀混合后用4分法从中选取1kg土壤，代表该点的混合样品。样品用聚乙烯塑料袋编号封装保存，防止交叉污染。 处理：样品带回实验室后，除去所采样品中石子，植物及其它杂质，充分风干后取部分样品，研钵捣碎研磨，过100目尼龙筛，在40℃烘箱中干燥24 h后干燥器皿中保存备用；将土壤样品1.0g置于250ml锥形瓶中，用少量蒸馏水润湿，加入硫酸-硝酸混合液10.0mL，待剧烈反应停止后，加入去离子水15mL，在瓶口插一玻璃漏斗，置于水浴锅中加热至80℃，保持60min，同时做空白对照。待加热完成后，降至室温，将试液（含残渣）全部移入100mL容量瓶中，用去离子水洗涤锥形瓶3-5次，洗涤液并入容量瓶，加去离子水至标线，摇匀，待测。 2.1.1.2 水体采集与处理 采集：采用孔径为0.04um醋酸纤微滤膜现场对水样进行过滤，过滤水样装入500mL经预先处理的超净聚乙烯瓶保存。在采集样品之前所使用的所有器皿必须先用样品水洗涤，润洗，至少3次后再将样品水装入瓶中。采样操作过程中均使用一次性聚乙烯手套，尽可能减少操作过程中带入的人为汞污染。 处理：带回实验室后加5.0mL12mol/L HCl，置于0-4℃保存，待测。 2.1.1.3 动物样品及农作物的采集与处理 采集：选择矿区附近农田中水稻（去壳，取其中大米）、玉米（去外包叶和玉米棒，取其中玉米粒）和蔬菜（带回实验室后先用高纯水冲洗表面，在100级洁净工作台里室温下进行干燥），然后密封于3层聚乙烯样品袋中，编号，冷冻保存直到分析；鸡、鸭、猪、牛、羊分别采集肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉等分装入预先处理的聚乙烯袋中，分别标记，-20℃保存。 处理：将已标记的动物样品及农作物分别磨碎，称取约0.2g（准确至0.0001g）经磨碎的样品，置于耐高温压力消解罐底部，加入5mL浓硝酸（分析纯），3mL过氧化氢（分析纯），摇匀，将