重组质粒的转化概述.ppt

重组质粒的转化;外源DNA与载体分子的连接即为DNA重组技术，重组的DNA分子式在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经限制性内切酶酶切的载体分子和外源DNA分子连接起来。将重组质粒导入感受态细胞中，将转化后的细胞在选择性培养基中培养，可以通过各种方法筛选出重组子，并可通过酶切电泳进行重组子的鉴定。;;感受态;感受态细胞制备方法及原理;CaCl2法制备感受态细胞;影响因素;转化;;转化过程所用的受体细胞一般是限制－修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株。;方法及原理;操作步骤;提高转化效率的方法;重组子的筛选;蓝白斑筛选;筛选原理;通过看培养皿上的菌斑的颜色就能直接知道是否有DNA插入。;;;抗生素抗性筛选;转基因技术;转基因技术就是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起??物体的性状的可遗传的修饰。人们常说的“遗传工程”、“基因工程”、“遗传转化”均为转基因的同义词。 ;基因工程和选择性繁殖技术有什么不同;“选择性繁殖”技术;植物转基因方法;;花粉管通道;农杆菌介导的植物转基因技术;感染 转化;转基因和克隆技术;克隆羊“多莉”的产生过程;*;转基因技术和传统育种技术有什么区别;转基因食品;;基因产品的开发现状;重组子的鉴定及基因表达产物的分析;利用有插入片段的重组载体的分子量比野生型载体分子量大。;根据重组DNA分子大小鉴定重组子 原理：有外源DNA片段插入载体后的重组DNA与载体DNA之间的大小差异。 基本方法：提取转化子的DNA，经琼脂糖凝胶电泳分离，电泳迁移慢的带是重组DNA的带。 此法是对重组子进行分析鉴定的最基本、最简单的方法，只适用于重组子的初步鉴定。;聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：;点样;;凝胶中的蛋白质染色：;直接染色电泳结果; ; 2.1 探针（Probe)的概念: 一段带有检测标记的与目的基因或目的DNA特异互补的已知核苷酸序列。; 此技术由Southern 1975年首先设计。被检测对象为DNA。 ;带有DNA片段的凝胶;;。;真空转膜槽;;