生物化学第二章 蛋白质预案.ppt

第二章 蛋白质;2.1 氨基酸的两性解离性质及等电点;◆ 通过改变溶液的pH，可使氨基酸分子的解离状态发生改变。◆ 氨基酸在酸性环境中，主要以阳离子的形式存在，在碱性环境中，主要以阴离子的形式存在。;两个概念;氨基酸的两性解离符合Bronsted – Lowry的酸碱质子理论，即氨基酸在水溶液中的偶极离子既起酸（质子供体），又起碱（质子受体）的作用。氨基酸完全质子化时，可以看成是多元酸.侧链不解离的中性氨基酸可看作二元酸，酸性氨基酸和碱性氨基酸可视为三元酸。; 在这里同样可以利用Handerson – Hasselbalch公式进行pH或氨基酸各种离子浓度比例的计算： [质子受体] pH=pK’+lg--------------- [质子供体] pK’为表观解离常数的负对数，可用测定滴定曲线的实验方法求得。其拐点处PH值即为PK’;等电点的计算公式:;等电点计算公式的推导：在氨基酸完全质子化时，各种不同氨基酸的等电点可由下面的方法推导出来： 对于中性氨基酸（一氨基一羧基氨基酸）：以R表示带电情况，则： R+ R0 + H+ K1’=[R0][H+]/[R+ ] 则 [ R+] = [R0][H+]/ K1’ R0 R- + H+ K2’=[R-][H+]/R0 则 [R-]= [R0] K2’/ [H+] 当在等电点时，[ R+] = [R-] 则有： [H+]2 = K1’ ·K2’ 即 [H+]= （K1’ ·K2’）1/2 等式两边取负对数得： pH=1/2（pK1’+pK2’） 也就是pI= 1/2（pK1’+pK2’） ;同样对于三个可解离的氨基酸例如天冬氨酸和赖氨酸来说，只要写出它的解离公式，然后取两性离子两边的pK值的平均值，则得其 等电点。如天冬氨酸的解离如下： R+ R0 R- R2- 则 pI= 1/2（pK1’+pK2’） 而赖氨酸的解离如下： R2+ R+ R0 R- 则 pI= 1/2（pK2’+pK3’） ;举例;小 结;举例;怎么办;怎么办;2.2 氨基酸的化学性质;2.2.1.2 与甲醛的反应：氨基酸是一种两性电解质，但不能直接用酸或碱来进行定量测定。这是因为氨基酸的酸、碱滴定的等电点pH过高（12-14）或过底（1-2），没有适当的指示剂可被选用。但如果加入过量的甲醛，生成二羟甲基氨基酸后即可降低氨基的碱性，而增加羧基的酸性，使其PK’值减少2-3个pH单位。这时即可用标准的NaOH溶液滴定。;2.2.1.3 与酰化试剂反应： 氨基酸的氨基与酰氯或酸酐在弱碱溶液中发生作用时，氨基即被酰基化。例如与苄氧（苯甲氧）甲酰氯（carbobenzyloxychlorride）反应： 这里-NH2中的一个H被苄氧甲酰基（可简写为Cbz）取代生成Cbz-氨基酸。除了苄氧甲酰氯外，酰化试剂还有叔丁氧甲酰氯，对-甲苯磺酰氯以及邻苯二甲酸酐等。这些酰化试剂在多肽的蛋白质的人工合成中被用作氨基的保护试剂。 另一个酰化试剂是丹磺酰氯（dansyl chloride），它是5-二甲基氨基萘-1-磺酰氯的简称，被用于多肽链NH2末端氨基酸的标记和微量氨基酸的定量测定。 ;用途：可以用来鉴定多肽或蛋白质NH2末端氨基酸.;2.2.1.4 氨基酸与2,4一二硝基氟苯(DNFB)的反应（sanger反应）;2.2.1.5 氨基酸与苯异硫氰酯（PITC）的反应（Edman反应）;用途：是鉴定多肽N-端氨基酸的重要方法。;2.2.1.7 形成西佛碱反应：氨基酸的α-氨基能与醛类化合物反应生成弱碱，即所谓西佛碱（Schiff’s base）。 R’ R