C18色谱柱维护常识教程.doc

【讨论】高效液相色谱柱的保护 各位同仁，为保证我们的分析效果，延长色谱柱的使用寿命，大家一起来贡献一下自己在色谱柱使用过程中的护柱秘诀吧。 我先来聊聊，算是抛砖引玉了1、最好用预柱。（但要注意，若有时出峰异常，要先看看是不是它有问题了）2、每次做完分析，都要进行冲洗，分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质，建议用90％甲醇冲洗30～60min；若分析用流动相中含以上物质，要先用10％甲醇（或用与分析用流动相同比例，把含酸、碱、盐溶液换成水）冲洗1小时左右，再梯度走到90％甲醇冲洗30～60min（若用多元泵）。有必要时再循环几次，可以适当缩短时间。若长时间不用该色谱柱，要冲洗好后，用纯甲醇或乙腈封存。3、若流动相中用到离子对试剂，更应该好好冲洗，且该色谱柱最好作为专用，不能再做其它物质分析用。因色谱柱填料性质已与原来所???同，在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重现。4、尽量避免反冲，除非该色谱柱厂家明确说明允许。5、普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。6、定期测柱效，有下降，可以用10％异丙醇甲醇冲洗色谱柱。若柱效还没有改善，可以再生，甲醇－二氯甲烷－甲醇。呵呵，还有的一时想不起来了，各位有经验的战友请发表高见！ 样品要采用0.22或0.45μm滤膜过滤，流动相采用0.45μm滤膜过滤并脱气。 2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围3．避免流动相组成及极性的剧烈变化。4. 避免纯水冲洗反相色谱柱。5．每次测试完毕，要用20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱（分析色谱柱250×4.6mm柱体积3.2ml）。如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕后将柱子用纯水冲洗干净，并保存于乙腈中。 6．压力升高是需要更换预柱的信号。 1：溶剂中的不溶物—应使用色谱纯溶剂，膜过滤（孔径不超过0.45μm）2：样品中的不溶物—应对样品进行膜过滤（孔径不超过0.45μm）3：泵，进样器等中的不溶物—在泵和进样器之间安装内置过滤器，在进样器和柱之间安装预过滤器4：柱内不溶物的形成：由于溶剂的不互溶而产生的沉淀—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱；在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀—检查样品液和流动相是否互溶；由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀—将色谱柱密封紧，并保持室温恒定！ 还有就是平衡色谱柱、色谱柱的再生：1 平衡色谱柱：反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水过渡。　　硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡如何平衡色谱柱？ 　　平衡过程中，将流速缓慢地提高；用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低，则需要较长的时间来平衡）2 色谱柱的再生：进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱！ 偶也来参与一下，谈一点拙见1.对于一些特殊型号的柱子，例如不同型号的手性柱应严格按照柱子的相应说明书所要求的进行维护，并按照其规定的范围选择试剂的种类，比例，PH ，等等；2.尽量避免柱子进气泡的现象出现，如在实验 过程中留心流动相的体积，同时对所需体积进行大概的估计，以免吸空，气泡进柱，尽管有多种排气泡的方法，但毕竟影响柱子的性能，尤其是比较“娇贵”的柱子； 每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的补偿，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！------ 一定得做！ 　　新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。 卡套柱的安装（不加预柱） 1．将卡套架套入柱芯2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套（见左图）3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片4．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧5．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端6．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。 卡套柱的安装（加预柱）1．将卡套架套入柱芯2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯（见左图）3．将已套到