第九章 固定化酶.pptVIP

;是酶工程研究中的一个重要领域 9.1 什么是固定化酶 固定化酶被确定下来是在1971年第一届国际酶工程会议上提出并确定。固定化酶是设计一种方法，使酶被束缚在特殊的载体上，使它与整体流动相分隔开，但还是能进行底物与效应物等分子交换，底物释放。 可看成一般化学反应中的固体催化剂, 但又赋予酶的催化特性。;9.2 固定化酶的优点 溶液性酶的缺点： 1.酶是蛋白质，稳定性差（热、酸碱、 有机溶剂对其有影响）， 2.不能回收,无法自动化、连续化生产， 3.专一性高。 固定化酶优点： 1.可以提高稳定性 2.能回收，自动化，连续化 3.专一性减弱 4.提高抗有机溶剂的能力; 一种容易回收，反复使用，成为可连续化、自动化的水不溶性酶，就称固定化酶(或：水不溶酶)。 固定化酶现在的发展是，固定的对象不一定全是酶，可以是细胞或细胞器、菌体。 统称为固定化催化剂。;9.3 固定化方法： 固定化方法 吸附法 共价偶联法 交联法 包埋法 ? 物理 离子交 固定化 偶联 吸附法 换吸附 载体 反应 格型包埋 微囊包埋 现有多孔物质包络法，超过滤法等。实际上用包埋法最多;各种固定化方法的优、缺点比较 吸附法 固定化方法 物理吸附法 离子吸附法 包埋法 共价键结合法 交联法 制备难易 易 易 较难 难 较难 结合程度 弱 中等 强 强 强 活力回收 高,酶易流失 高 高 低 中等 再生 可能 可能 不能 不能 不能 费用 低 低 低 高 中等 底物专一性 不变 不变 不变 可变 可变 ?;吸附法 物理吸附(氢键、疏水键等作用力将酶固定 于不溶性载体上) 无机吸附剂（高岭土、皂土、硅酸、氧化 铝等)吸附量小、有些酶发生吸附变性 有机吸附剂（纤维素、胶原等）吸附量略 大(～50mg/g载体),不??生变性失活， 比较受重视。 有些微生物分泌胶水一样的粘多糖，使微生物与固体物质固定化。;;离子交换法： 在合适条件下（pH、离子强度），酶的侧链与载体发生离子交换的作用而达到的固定化，CM-纤维素、DEAE-纤维素，吸附量 50~150mg/g 优点： 操作方便，条件温和，可再生 缺点： 吸附弱，不适宜的pH，高盐浓度，高底物浓度，高温等都能把吸附的酶解吸下来。;现在经过改进和改善的方法： 1.选择最佳条件操作（如温度、 pH）， 2.选吸附量大的载体，控制酶和载 体量， 3.采用高酶量吸附； 4.开发新载体， 5.对酶进行修饰后再进行交换吸附。 ; 如DEAE-纤维素吸附α-淀粉酶，蔗 糖酶， DEAE-纤维素不一定氨基酸酰化酶 如开发出：N-烃基琼脂糖衍生物 吸附黄嘌呤氧化酶，脲酶等酸性pH的酶专一吸附糖蛋白，而且非常牢固。借助静电力和疏水键吸附。;制备亲和吸附剂，如 ConA-葡聚糖用 来吸附蛇毒核酸酶 如：对酶进行修饰后再与载体结合，胰蛋白酶+丙烯酸与顺丁烯二酸酐的水溶性共聚体共价偶联，再加DEAE-纤维素结合。 结果：结合力增大(吸附大)，相当稳定，使用寿命长，有时可连续使用3个星期。;多孔物质包络法： 利用棉布、尼龙布、金属丝网、海绵、塑料等固定化放线菌、真菌组成盘状生物反应器，进行连续生产有机酸、糖化酶、四环素。 这些材料足够大而空隙又不大，能使细胞进入空隙，常为细胞直径的数倍大。 超过滤法： 利用超过滤膜将细胞固定化。底物和产物可自由进出超过滤膜，而膜内细胞却出不来。如膜反应器和生物传感器。但需防细胞生长使用浓度过高而使膜破裂。;