原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
?Western Blot原理
?Western Blot流程
?Western Blot常见问题
;?Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。
? Western Blot 可以：
1.从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；
2.定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；
3.用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。
?若要对表达蛋白进行细胞定位，confocal（激光共聚焦）应是首选的方法。
?若要进行蛋白相互作用的关系，应考虑免疫共沉淀技术（IP或co-IP）。;?蛋白样品的制备
?SDS
?转膜
?封闭
?一抗杂交
?二抗杂交
?底物显色;? SDS电泳
? 转膜及抗体检测;?胶不平？
?凝胶漏液？;?条带比正常的窄？
?“微笑”或“倒微笑”条带？;?凝胶肿胀或卷曲？
?条带歪斜或漂移？
?单个或多个白点？
?转膜缓冲液过热？ ;1.蛋白??子量 10KD
2.蛋白的等电点 9
3.SDS浓度不合适
4.凝胶太厚;1.膜没有均匀浸湿
2.膜或者缓冲液污染
3.封闭不充分
4.抗体与封闭剂出现交叉反应
5.抗体浓度过高;1.抗体保存不当
2.抗原不充足
3.膜的漂洗过度;1.一抗不是唯一特异的
2.二抗出现非特异结合;1.抗体质量好价格高的厂家：Abcam，CST（cell signaling technology），RD，Roche，BD
2.抗体质量中等价格适中的厂家：Santa Cruz，Abgent，Novus
文档评论（0）