实验方案2013223.docVIP

金天格药效及毒理试验方案 一、小鼠急毒 先测定小鼠LD50 ，如不能测出，在进行小鼠最大给药量测定。 二、大鼠6个月长毒 一 试验分组及给药剂量：共分为5组，①对照组、②人工虎骨粉A组、③人工虎骨粉B组大剂量、④人工虎骨粉B组中剂量、⑤人工虎骨粉B组小剂量。 对照组灌胃去离子水；人工虎骨粉A组：灌胃人工虎骨粉A组3.6g/kg；人工虎骨粉B组大剂量组：灌胃人工虎骨粉B3.6g/kg；人工虎骨粉B组中剂量组：灌胃人工虎骨粉B1.8g/kg；人工虎骨粉B组小剂量组：灌胃人工虎骨粉B0.9g/kg。分别相当临床人用量的60、60、30、15倍。 临床用量：口服，一日3次，一次3粒，0.4g/粒。 人体重按60kg计算，每天每公斤体重服药量0.06g/kg。 （二）动物分组：选取150只健康SD大鼠，分为5组，每组30只，雌雄各15只。按体重大小均匀分组。每组大鼠分放鼠盒6个，其中♂①-③，大鼠编号依次为♂1-5、♂6-10、♂11-15；♀①-③，大鼠编号依次为♀1-5、♀6-10、♀11-15。 三 给药途径及时间：采用灌胃给药，给药体积为10ml/kg。给药浓度分别为：A组36%，B组大36%，B组中18%，B组小9%。每日固定时间给药。连续给药24周，每周灌药6天。 四 大鼠检杀 大鼠分三次检杀，3个月第一次检杀，各组均取雌雄①号盒子；6个月第二次检杀，各组均取雌雄②号盒子；停药4周第三次检杀，各组均取雌雄③号盒子。 10％乌拉坦1ml/100g腹腔注射麻醉，分离颈总静脉，取血做血液学、血液生化学检测。 五 检测项目： 1. 一般观察：给药期间每周称体重、食量各一次，观察有无死亡或濒死大鼠以及大鼠毛色、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便性状等。食量为每盒24小时的摄食量除以盒中鼠数，即为该盒大鼠的平均摄食量。 2. 血液学指标 采用Sysmex XS-800i血液分析仪测定24项指标，按指导原则要求统计红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞容积（HCT）、平均红细胞容积（MCV）、平均红细胞血红蛋白（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、白细胞总数（WBC）及其5分类、血小板（PLT）13项，加凝血时间（Coag-T）、网织红细胞（RET），共统计15项。 3. 血液生化学BS-300全自动生化分析仪检测：总胆红素（T－BIL）、总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、/球蛋白 A/G 、谷丙转酶（ALT）转酶（AST）、/谷丙 AST/ALT 、碱性磷酸酶（ALP）、糖（GLU）、总胆固醇（T－CHO）尿素氮（BUN）、肌酐（Crea）、肌酸酶XD-685电解质分析检测：钾离子（K）、钠离子（Na）、氯离子（CL）离子。共项。. 病理组织学检查 光学显微镜检查 内容包括：心、主动脉、肺、气管、食管、胃、肝、胰腺、小肠、大肠、颌下腺、肾、膀胱、子宫、卵巢、阴道、睾丸、附睾、前列腺、肾上腺、甲状腺、垂体、脑（大脑、脑干、小脑）、脊髓、坐骨神经、脾、胸腺、肠系膜淋巴结、骨髓、皮肤。共32个脏器和组织。 6. 统计方法 统计均采用EXCEL2003软件。 三、药效： （一）对骨质蔬松模型的研究 1、对醋酸泼尼松所致大鼠骨质疏松模型的影响 造模及给药 取3月龄雄性SD大鼠分为：①正常对照组、②低钙+醋酸泼尼松组、③低钙+醋酸泼尼松组+金天格、④低钙+醋酸泼尼松组+金天格替代大剂量、⑤低钙+醋酸泼尼松组+金天格替代中剂量、⑥低钙+醋酸泼尼松组+金天格替代小剂量。 除①外，其余大鼠均每周腹腔注射醋酸泼尼松2次，共5周，并每天灌胃相应药物；①组每周腹腔注射生理盐水2次，共5周，并每天灌胃药物溶剂。 2、对维甲酸所致大鼠骨质疏松模型的影响 造模及给药 取3月龄SD大鼠分为：①正常对照组、②低钙+维甲酸组、③低钙+维甲酸+金天格、④低钙+维甲酸组+金天格替代大剂量、⑤低钙+维甲酸组+金天格替代中剂量、⑥低钙+维甲酸组+金天格替代小剂量。 除①外，其余大鼠维甲酸纤维素溶液灌胃，每天1次，共2周，并于6小时后灌胃相应药物；①组大鼠纤维素溶液灌胃，每天1次，共2周，并于6小时后灌胃相应药物溶剂。 3、客观指标 （1）骨密度测量 采用定量计算机断层扫描法 QCT （2）骨组织计量学观察 分析骨质疏松的病理变化和动力学特征：骨小梁面积、骨小梁周长、骨小梁厚度等。 （3）骨代谢生化指标 骨特异性碱性磷酸酶（B-ALP）：评价骨形成特异性指标，用酶联免疫测定法（ELISA）） 药效五个方面：骨质蔬松、抗炎、抗风湿、镇痛、镇静，共计13个试验