是品种N-亚硝胺类的测定.pptVIP

* * 5 比色法测定食品中N-亚硝胺类 食品中挥发性N-亚硝胺类化合物的测定，可采用气相色谱一质谱联用法、气相色谱一热能分析仪法及分光光度比色法。这里介绍分光光度比色测定法。 5.1 原理 本法主要是利用食品中挥发性亚硝胺可采用夹层保温水蒸气蒸馏加以纯化，在紫外光的照射下，亚硝胺分解释放亚硝酸根。通过强碱性离子交换树脂浓缩，在酸性条件下，与对位氨基苯磺酸形成重氮盐，再与M萘乙烯二胺二盐酸盐形成红色偶氮染料来测定。颜色的深浅与亚硝胺的含量成正比，此法可用于测定挥发性N一亚硝胺总量。 5. 2 试剂 (1)磷酸缓冲溶液(0.1mol／L，pH7)：吸取0.1mol／L磷酸氢二钠61mL和0.1mol／L磷酸二氢钠39.0mI混合而成。 (2)300g／L乙酸溶液。 (3)0.5mol／L氢氧化钠溶液。 (4)显色试剂 显色剂A——10g／L对氨基苯磺酸的300g／L乙酸溶液。 显色剂B——2g／L N一1一萘乙烯二胺二盐酸盐的300g／L乙酸 溶液。 显色剂C——10g／L对氨基苯磺酸的1.7mol／L盐酸溶液。 显色剂D——l0g／L N-1一萘乙烯二胺二盐酸盐溶液。 (5)盐酸溶液(1.7mol／L)。 (6)二乙基亚硝胺标准溶液(100μg／mL)。 (7)亚硝酸钠标准溶液(100μg／mL)。 (8)强碱性离子交换树脂：交链度8，粒度150目。 (9)正丁醇饱和的1mol／L氢氧化钠溶液。 5.3 仪器 (1)分光光度计。 (2)紫外灯。 5.4 操作步骤 (1)亚硝胺标准曲线的绘制 (2)样品制备 液体样品：根据样品中亚硝胺的含量称取样品10.0～20.0g，移人100mL容量瓶中，加入氢氧化钠溶液使其浓度为1mL／L，摇匀后过滤，收集滤液待测定。 固体样品，取经捣碎或研磨均匀的样品20.0g，加入正丁醇饱和的lmol／L氢氧化钠溶液，移人100mL容量瓶中，并加至刻度，摇匀，浸泡过夜，离心分离，取清滤液待测定。 (3)挥发性N一亚硝胺的总量的测定 吸取样品的清液50mI。移人蒸馏瓶内进行夹层保温水蒸气蒸馏，收集25mi。馏出液，用300g／L乙酸调节至pH3～4。再移入隙馏瓶内进行夹层保温水蒸气蒸馏，收集20mL馏出液，用0.5mol／L氢氧化钠调至pH7～8。将馏出液在紫外光下照15min，通过强碱性离子(氯离子型)交换柱(1cm×0.5cm)浓缩，以少量水洗后，用1mol／L氯化钠溶液洗脱亚硝酸根，分管收集洗脱液(每管1mL)，至所收集的洗脱液加入显色剂不显色为止。各管中加人1.0mL，pH7有磷酸缓冲溶液，0.5mL显色剂A，摇匀后再加入0.5mL显色剂B，以下操作同标准曲线的绘制。根据测得的吸光值，从标准曲线中查得每管亚硝胺的含量，汇总总含量。