植物中蛋白质的测定.pptVIP

肽的功能 由于多肽这类生物活性物质是生命活动重要的参与者，它影响和调节着细胞与细胞，组织与组织间的生理活动，并且反馈着细胞与组织的化学反应信息。 功能肽是由氨基酸构成，活性高，在极微量的使用下，都能发挥作用，它们在人体内被利用后迅速的被代谢，最终变为氨基酸和水，无残留，无副作用。 …… …… 很早以来科学家就 想把它们应用到人们的日 常饮食中，作为营养补充剂和功能因 子，用以影响或改善人们的营养代谢、 脂肪代谢、糖代谢、调节神经系统等。 双缩脲比色法 一 原理 二 试剂 三 操作步骤 四 计算 测定方法 半微量凯氏滴氮法（水蒸气蒸馏法） Folin-酚试剂法 紫外吸收法 考马斯亮蓝染色法 测定面粉中蛋白质的含量 五 注意事项 一 原理 二 实验材料与仪器 三 操作步骤 四 计算 双缩脲比色法 测定面粉中蛋白质的含量 五 注意事项 1.双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个尿素分子经180 ℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。 原理 原理 　　　 2.在强碱性溶液中，双缩脲与 CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个肽键或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 原理 3.测定： 在一定的浓度范围内，紫色络合物颜色深浅与蛋白质含量呈线性关系。而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可在540 nm处比色再与同样处理的标准蛋白质来比较测定蛋白质含量。 　　　测定范围为1－10mg蛋白质/ml。干扰这一测定的物质主要有： 硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。 实验材料与仪器 1.仪器和材料： 分光光度计、7支试管、 1mL 刻度吸管3支、移液器、坐标纸、摇床、离心机、 具塞三角瓶、分析天平。 2.试剂：四氯化碳溶液、少许面粉、双缩脲试剂、9 g/L的 NaCl溶液、蛋白质标准液 （10 g/L)。 分析天平 具塞三角瓶 离心机 摇床 一.样品处理 1.0.25 g小麦面粉＋2ml四氯化碳； 2.加塞，在摇床上振摇30分钟，使之充分混匀、反应，然后于实验台上静置10分钟； 操作步骤 3.离心，4000dr/min，离心15分钟； 4.取上清液比色 操作步骤 操作步骤 二标准曲线的制作与 样品中蛋白质的测定 1.取7支试管，编号，按照表1数据操作。 2.利用分光光度计测光吸收值并记录。 表1 管号 试剂 0 标准管 测定管 1 2 3 4 5 6 蛋白质标准液(10mg/ mL) - 0.2 0.4 0.6 0.8 1 - 面粉溶液上清液mL - - - - - - 1 氯化钠溶液 mL 1 0.8 0.6 0.4 0.2 - - 双缩脲试剂 mL 4 4 4 4 4 4 4 λ光吸收值 0 0.085 0.181 0.261 0.354 0.438 0.317 各管浓度 mg/ml 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2 ？ 　　 3.在坐标纸上以各管蛋白质含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。 操作步骤 计算 从标准管中选一管与测定管光吸收值接近值，按公式 计算待测血清样本的蛋白质浓度，从上可选 A测= 0.317 g/L，C标=0.354 g/L，A标=1.6 g/L；则得到：C测=1.432 g/L。 1.本实验是定量实验，要求所有玻璃仪器必须清洁，整齐、干燥。蛋白质标准液和淀粉上清液取量必须准确。 2.各管加好样后必须充分混匀。 3.显色反应需在20到30min才完成。 注意事项 谢谢观赏