第八章微生物的遗传与变异2009.pptVIP

③基因重组法 A. 定义 基因重组法是利用人工手段，将供体细胞DNA融合入另一个细胞的DNA中，使受体细胞基因重新排列，并出现植入DNA基因对应生物特性的细胞改造方法。基因重组是两种DNA的拼接，不发生任何碱基对结构上的变化。这是与基因突变最大的不同之处。 B．重组形式 基因重组同样有自发的基因重组与人工的基因重组之分，二者的原理本质上是完全相同的。微生物中基因重组的形式很多。在真核微生物中，基因重组是通过二个配子相互融合的有性繁殖的过程中发生的，故称为杂交。在细菌等原核微生物中通常只是部分遗传物质的转移和重组，如转化、转导和接合等都是基因重组在细胞水平上的反映。 Ⅰ.转化 转化(Transformation)是供体细胞研碎物中的DNA片段直接吸收进入活的受体细胞的基因重组方式。受体细胞获得了供体细胞的部分遗传性状。 转化现象是1928年英国的细菌学家格里菲斯首先发现的。为纪念格里菲思先生当时发现这一现象的实验被命名为格里菲斯实验。 格里菲斯实验 1928年英国细菌学家格里菲斯(Griffith)发现肺炎双球菌中S Ⅲ型菌株，菌落光滑，产生荚膜，当它感染人、小白鼠或家免等时均可致病。 其中R Ⅱ型菌株菌落粗糙，不产生荚膜物质，感染人、小白鼠或家免均不致病。当将R Ⅱ型活菌注射小白鼠，小白鼠健康不致病，并可从健康的鼠体分离到RⅡ型肺炎双球菌菌落；将S Ⅲ型的肺炎双球菌注射小白鼠，小白鼠被杀死，从小鼠体内会分离出S Ⅲ型的肺炎双球菌；将加热杀死的S Ⅲ型细菌破碎细胞注射入小鼠细胞，小白鼠健康不致病，小鼠体内没有S Ⅲ型细菌；将加热杀死的S Ⅲ型细菌与R Ⅱ型活细菌混合后注射小白鼠，小白鼠死亡，并可从死鼠体内分离到S Ⅲ型活细菌。 当时虽然发现了这一有趣的现象，但并不知道其中的原因。 1944年才通过试验找出了其中的原因。试验方法如下： 细菌转化过程可大体分为以下几步： 感受态细胞的出现 吸附外源DNA片段 外源DNA进入细胞内 受体DNA解链 形成受体DNA—供体DNA复合物 DNA复制和分离 其中感受态细胞的出现是关键。 所谓感受态细胞是能吸收外来的DNA片段，并能把它整合到自己的染色体组上以实现转化的细胞。 感受态细胞是由遗传性决定的，也受细胞的生理状态、菌龄、培养条件的影响。 目前发现自然状态下许多其它细菌、放线菌、真菌和高等动植物中都也有转化现象。 Ⅱ.接合 细菌的接合是细菌遗传物质染色体DNA片段或质粒DNA通过细菌与细菌的直接接触而进行的转移和重组的现象。在前面的章节中，细菌的有性繁殖实际上就是这里所说的结合，有关内容在此不再重复。 Ⅲ.转导 遗传物质通过噬菌体的携带而转移的基因重组现象称为转导。转导是1951年辛德尔(Zinder)和莱德贝尔格(1Jederberg)在研究鼠沙门氏伤寒杆菌重组时发现的。 实验中L-22细菌这一侧出现（A+B+）菌，L-22菌是如何获得色氨酸合成功能的呢？研究发现LA—22在培养过程释放温和的噬菌体P—22，P—22通过滤板侵染供体LA—2，当LA—2裂解后，产生“滤过因子”大部分是P—22，其中极少数在成熟过程包裹了LA—2的DNA片段(含合成色氨酸的基因)，并通过滤板再度感染LA—22，使LA—22获得合成Tru—能力，由噬菌体携带来的DNA片段与受体细胞的基因重组，这个现象称为转导作用。 基因重组的3种形式，其中细菌的接合必需两个细胞直接接触，而转化和转导无需细胞直接接触，转化没有噬菌体作媒介；转导必须通过噬菌体转移遗传物质。基因重组率均很低。 三、遗传工程与细菌改造 遗传工程是70年代初发展起来的生物技术。按照人们预先设计的生物蓝图，通过对遗传物质的直接操纵、改组、重建，实现对遗传性状定向改造的方法称为遗传工程。 目前采用的基本方法是： 把遗传物质从一种生物细胞中提取出来，在体外施行“外科手术”，然后再把它导入另一种生物细胞中，改变其遗传结构，使之产生符合人类需要的新遗传特性，定向地创造新生物类型。 之所以称其为遗传工程是由于，它的操作方法采用了对遗传物质体外加工，类似工程设计那样很高的预见性、精确性与严密性。 ①遗传工程的方法 遗传工程方法包括两个水平的研究：一种是细胞水平；另一种是基因水平。所以，又可把它分为细胞工程和基因工程。 细胞水平主要指的是两个细胞的原生质体融合，实验操作停留在细胞的处理层次。 相比而言目前研究的主要内容是基因工程。因此，狭义的讲，遗传工程就是基因工程。 基因工程是70年代发展起来的，在分子水平上剪接DNA片段，与同种、同属或异种、甚至异界的基因连接成为一个新的遗传整体，再感染受体细胞，复制出新的遗传特性的机体。基