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细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 原子力显微镜 利用原子之间的范德华力（Van Der Waals Force）作用来呈现样品的表面特性。 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 第五章 细胞研究的细胞生物学技术 细胞研究的细胞生物学技术 * * 黄 辰 生物医学基础研究中心 遗传学与分子生物学系 029细胞形态研究方法 一、显微技术 荧光显微镜 荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别： 1.?照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上； 2.?光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜； 3.?有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。 暗视野显微镜　　暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有挡光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。 倒置显微镜　　组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，通常具有相差物镜。　　在装配设计上趋于采用组合方式，集普通光镜加相差、荧光、暗视野、DIC、摄影装置于一体，从而操作灵活，使用方便。 激光共聚焦扫描显微镜 负责人 罗禹 电话　　激光共聚焦扫描显微镜（laser confocal scanning microscope）用激光作扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫描成像，扫描的激光与荧光收集共用一个物镜，物镜的焦点即扫描激光的聚焦点，也是瞬时成像的物点。由于激光束的波长较短，光束很细，所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力，大约是普通光学显微镜的3倍。系统经一次调焦，扫描限制在样品的一个平面内，调焦深度不一样时，就可以获得样品不同深度层次的图像，这些图像信息都储于计算机内，通过计算机重新组合，就能显示细胞样品的立体结构，给出细胞内各部分之间的定量关系及各种结构线度。 物镜 弧光灯 荧光滤光镜 聚焦光圈 目镜 滤光镜 激光器 检测针孔 光源针孔 光电倍增管 荧光显微镜的工作原理 激光扫描共聚焦显微镜的工作原理 滤光镜 物镜 荧光滤光镜 激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态，也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的定量。 激光器的特点: 1) 方向性好: 激光基本沿直线传播。 2) 单色性好: ??=10-8nm。 3) 高 亮 度: 激光方向性好, 其在空间上的能量分布是高度集中的。 4) 偏 振 性: 激光为平面偏振光, 光纤耦合。 激光扫描共焦显微镜的设计特点： 1)点照明 2)具有照明pinhole和探测pinhole 3)照明pinhole和探测pinhole共轭(共焦), 共焦点即被探测点，被探测点所在的平面为共焦平面 4)具有扫描系统—— 逐点扫描成像 5)具有多个（四个） 荧光通道，可同时探测多个被标记物 激光共聚焦显微镜的应用 单、双、三,四色标记检测。 精确的一、二、三、四维观察。 高品质的荧光成像、透射成像、物体表面反射成像。 静态和动态观察(CA2+,pH,膜电位,膜流动性等)。 定性以及定量分析。 特殊的光反应(FREP,FRAP,CAGED-UNCAGE