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神经元特异性烯醇化酶 NSE 定量检测试剂盒 时间分辨免疫荧光法 研制方案 苏州新波生物技术有限公司 研 制 方 案 1、试剂盒研制的关键点 NSE-TRIFMA对检测灵敏度要求不高，因此，快速、简便是本试剂盒研制的关键点。 2、实验方案 NSE是抗原表位丰富的蛋白质分子，NSE-TRIFMA的研制拟采用双抗体夹心免疫分析法。一株抗体用于标记，另一株抗体用于包被。另外，为加快免疫反应，拟使用高浓度的标记抗体。 3、原理简述 以铕离子 Eu3+ 标记抗NSE单克隆抗体,用另一株与之配对的单克隆抗体包被微孔。标准或样品中的NSE于微孔内与固相单克隆抗体和铕离子标记单克隆抗体发生免疫反应。洗涤分离后，固相表面的免疫复合物中的Eu3+浓度通过解离-荧光增强方式进行测量，荧光强度与血清NSE浓度成正相关。检测原理示于下图： NSE TRIFMA分析原理 4、研制主要工作内容 4.1原料与各组份的制备 主要包括：铕标记抗NSE单克隆抗体 McAb-Eu 制备、NSE TRIFMA试剂盒各组分制备（抗-NSE包被反应板的制备、封闭液的配制、包被抗-NSE、铕标记物溶液的制备、NSE校准品的制备、浓缩洗液的制备、铕标记稀释液的制备、分析缓冲液的配制）。 4.2关键工艺的确定 主要包括：NSE包被浓度的选择、铕标记条件和使用浓度的确定、反应时间的确定、临界值的确定，等。 4.3质量评估 主要包