“王松：基因工程中有关限制酶的高考试题归类”要点.docVIP

基因工程中有关限制酶的高考试题归类解析 王松（辽宁省沈阳市同泽高中110000） 手机Email：luckywangsong@163.com 新人教版选修三的内容包括基因工程，细胞工程，胚胎工程，生态工程等内容，大部分内容都是记忆性的，在高考中的难度要求比较低，本人认为在近几年的高考题中难度最大的就是基因工程中有关限制酶的使用，现归纳如下： 1 1种限制酶酶切造成的载体与目的基因的自身成环 例1 （2008年高考海南卷26题）图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR 为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。 据图回答： （1）将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用ＤＮＡ连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有 、 、 三种 。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行 。 （2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 ；接种到含青霉素培养基中，能生长的原核宿主细胞所含的连接产物是?????????；???（1）目的基因—载体连接物 载体--载体连接物 目的基因--目的基因连接物 分离纯化（2）载体--载体连接物；目的基因--载体连接物载体--载体连接物 （3） EcoRI和BamHI下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，l、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有 个游离的磷酸基团。 （2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。 （3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Srna Ⅰ切割，原因是 。 （4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 。 （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。 （7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 （4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 （5）DNA连接 （6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞 （7）蔗糖为唯一含碳营养物质 解析：（1）中的问题是一个新的问法，由于脱氧核糖与磷酸交替连接，质粒分子含有2条链，故有2个游离的磷酸基团（8分）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有 ▲ 个游离的磷酸基团。 （2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 ▲ 。 （3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Srna Ⅰ切割，原因是 ▲ 。 （4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 ▲ 。 （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 ▲ 酶。 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 ▲ 。 （7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 ▲ 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 （4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 （5）DNA连接 （6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞 （7）蔗糖为唯一含碳营养物质 2 两种限制酶酶切 2 .1 限制酶酶切重组载体 例3 (2008年高考江苏卷32题) 将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。 请根据以上图表回答下列问题。 （1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要