1.液相色谱特点及主要类型要点.pptVIP

仪器分析课程讲义 第三章 高效液相色谱分析 目录 §3-1 高效液相色谱法的特点 §3-2 高效液相色谱法的主要类型及原理 §3-1 高效液相色谱法的特点 在经典的液体柱色谱法基础上，引入了气相色谱法的理论。 在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化。 高效液相色谱法的突出特点： 1）高压（150－350*105Pa） 2）高速（较经典色谱法） 3）高效（柱效约为30000n /米） 4）高灵敏度（高灵敏度的检测器：紫外10-9g，荧光： 10-11g ） §3-1 高效液相色谱法的特点 §3-1 高效液相色谱法的特点 §3-2 高效液相色谱法的主要类型及原理 1、液-液分配色谱liquid- liquid partition chromatography 2、液-固吸附色谱liquid- solid adsorption chromatograph 3、离子交换色谱ion-exchange chromatograph 4、离子对色谱ion-pair chromatograph 5、离子色谱ion chromatograph 5、离子色谱ion chromatograph 5、离子色谱ion chromatograph 6、排阻色谱size- exclusion chromatograph 7、亲和色谱(AC)Affinity chromatograph 液相色谱分离类型参考表 * 2004-11-24 一、 HPLC与经典LC区别 主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段 1．经典LC：仅做为一种分离手段 柱内径1~3cm，固定相粒径100μm 且不均匀 常压输送流动相 ；柱效低（H↑，n↓） 分析周期长、无法在线检测 2．HPLC：分离和分析 柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形，匀浆装柱） 高压泵输送流动相；柱效高（H↓，n↑） 分析时间大大缩短、可以在线检测 二、HPLC与GC差别 相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象、流动相及操作条件的差别 1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测，仅能分析有机物的20% HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测，用途广泛，占有机物的80% 2．流动相差别 GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、 改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性 3．操作条件差别 GC：加温操作; HPLC：室温；高压（液体粘度大） 1、液-液分配色谱 liquid- liquid partition chromatograph 2、液-固吸附色谱 liquid- solid adsorption chromatograph 3、离子交换色谱 ion-exchange chromatograph 4、离子对色谱 ion-pair chromatograph 5、离子色谱 ion chromatograph 6、排阻色谱 size- exclusion chromatograph 7、亲和色谱(AC) Affinity chromatograph 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。 基本原理：各组分在固定相吸附剂上竞争性吸附与解吸固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 特点：适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交