川明参多糖提取工艺及其免疫活性研究.pdfVIP

川明参多糖的提取工艺及其免疫活性研究 研究生：赵兴洪 指导教师：殷中琼教授魏琴教授(宜宾学院) f四川农业大学，动物医学院 中国成都611130) 摘要 川明参属伞形科川明参属，在形态上与明党参相近，是我国特有的单种属植 物，主要分布在四川，多为栽培，其干燥根为四川常用道地中药材及滋补食品。 研究表明，具有润肺化痰、和胃、生津、解毒等功效，主治肺热咳嗽、热病伤阴， 为滋阴要药。实验室前期研究表明， 川明参多糖硫(Chuanmingshen Violaceum Polysaccharides，CVP)酸化后具有抗病毒作用，本次研究对川明参多糖提取工 艺、体内外免疫活性进行了系统的研究。 1．川明参多糖提取工艺研究本研究采用苯酚．硫酸法和DNS法相结合对多糖定 量；CVP最佳提取工艺通过单因素试验和正交试验进行确定。结果显示：CVP 的最佳提取工艺为提取温度为100℃，提取时间为4h，料液比为1：30，粉碎粒度 为80目。结果表明，本研究得到的提取、纯化干燥方法高效、简便、成本低， 且采用本方法纯化干燥得到多糖纯度达93．85％。 2．川明参多糖及其硫酸化物对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响本研究采用四 甲基偶氮唑盐(3-(4，5-dimethylthiazol-2-y1)-2，5一diphenyltet-razolium bromide， MTT)法检测不同浓度的CVP及SCVP对静息期细胞、伴刀豆球蛋白A (Concanavalin A，Con_A)处理细胞、脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)处理 细胞的增殖情况。结果显示：与对照组相比较，CVP各浓度对静息期细胞和LPS 处理细胞的增殖均无显著影响，但与ConA具有协同增殖作用：SCVP能活化淋 巴细胞促进其显著增殖，与ConA和LPS具有协同增殖作用，并有一定的量效 关系。结果表明，CVP及SCVP能促进小鼠脾淋巴细胞体外增殖，且SCVP对 小鼠脾淋巴细胞具有有丝分裂原性。 3．川明参多糖及其硫酸化物对环磷酰胺致免疫低下小鼠免疫水平的影响本研 究采用CY来诱导小鼠免疫低下；免疫器官变化情况通过测定胸脾指数来衡量； CVP及SCVP不同剂量对静息期细胞、ConA处理细胞、LPS处理细胞增殖活性 万方数据 的变化情况运用MTT法进行检测；血清IFN一1，和IL一2采用ELISA试剂盒检测。 结果显示：与模型组相比CVP和SCVP各试验剂量组均能显著(P0．05)提高 免疫低下小鼠的胸腺指数和脾脏指数； CVP和SCVP各试验剂量3种处理方式 脾脏淋巴细胞光密度(OD)值均显著(P0．05)高于模型组；与模型组相比CVP 和SCVP各试验剂量组均能显著提高免疫低下小鼠血清细胞因子IFN．Y和IL一2 的水平。结果表明，CVP和SCVP可以通过提高免疫低下小鼠免疫器官指数、 各处理脾脏淋巴细胞增殖和血清IFN．丫和IL．2含量，从而提高机体的免疫力。 4．川明参多糖对鸡新城疫疫苗免疫应答的影响本研究对7日龄鸡分组、注射新 城疫疫苗、连续7天按要求口服CVP，于14日龄、21日龄、28日龄采集相关 样品，通过对血清抗体水平、红细胞免疫功能、T淋巴细胞增殖活性和T淋巴细 胞亚群的测定，进而评价CVP对疫苗免疫应答的影响。结果显示：在第14日龄 和28日龄时，CVP给药各组抗体效价均显著高于(PO．05)对照组；在第14 日龄和21日龄时，CVP给药各组外周血淋巴细胞增殖率均显著高于(P0．05) 对照组：在第14日龄和28日龄时，CVP给药组的红细胞C3b受体花环率均显 著(P0．05)高于对照组：在第21日龄和28日龄时，CVP给药组的红细胞免 疫复合物花环率均显著(PO．05)低于对照组：在第21日龄和28日龄时，CVP 中剂量组的T淋巴细胞亚群CD4+／CD8+L匕率显著(P0．05)高于对照组。结果 表明，CVP能增强疫苗免疫后的体液免疫的水平，且延长了疫苗的保护时间： CVP能够促进细胞免疫功能，并有一定的剂量依赖关系；CVP能够延迟循环免 疫复合物的消除；CVP具有诱导T淋巴细胞亚群CD4+／CD8+比率上升的作用。 关键词：川明参多糖；提取工艺优化；体外免疫活性；体内免疫活性 11 万方数据 Abs仃act Study of Chuanmingshen violaceum polysaccharides extraction process and its immune activity Master candidate：ZHAO XingHong(veterinary Medincine) Directed by Prof．YIN Zhongqiong and Prof．WEI Qing(Yibin College) 1．Chuanmingshen vi