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分子生物学技术原理 分子生物学：在分子水平上研究生命现象的科学。通过研究生物大分子(核酸、蛋白质)的结构、功能和生物合成等方面来阐明各种生命现象的本质。研究内容包括各种生命过程。比如光合作用、发育的分子机制、神经活动的机理、癌的发生等 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。CRISPR/Cas9 系统通过将入侵噬菌体和质粒 DNA 的片段整合到 CRISPR 中，并利用相应的 CRISPR RNAs（crRNAs）来指导同源序列的降解，从而提供免疫性此系统的工作原理是 crRNA（ CRISPR-derived RNA ）通过碱基配对与 tracrRNA （trans-activating RNA ）结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物，此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA。也称微生物环境基因组 Microbial Environmental Genome, 或元基因组） 即生境中全部微小生物遗传物质的总和。它包含了可培养的和未可培养的微生物的基因， 目前主要指环境样品中的细菌和真菌的基因组总和。而所谓宏基因组学 (或元基因组学， metagenomics) 就是一种以环境样品中的微生物群体基因组为研究对象， 以功能基因筛选和/或测序分析为研究手段， 以微生物多样性、 种群结构、 进化关系、 功能活性、 相互协作关系及与环境之间的关系为研究目的的新的微生物研究方法。一般包括从环境样品中提取基因组 DNA, 进行高通量测序分析，或克隆DNA到合适的载体，导入宿主菌体，筛选目的转化子等工作。表面展示（surface display）是一种新的基因操作技术，使表达的多肽以融合蛋白形式展现在核糖体、病毒或细胞表面，保持相对独立的空间结构和生物活性。借以研究多肽的性质、相互识别和作用，筛选特定功能的多肽结构，实现蛋白质的固定化和定向进化。噬菌体表面展示技术和酵母表面展示技术是应用最广泛的技术，流式细胞仪在各种展示技术中的高效准确的筛选应用也越来越被关注和使用采用重组DNA技术，将不同来源的DNA分子在体外进行特异切割，重新连接，组装成一个新的杂合DNA分子。在此基础上，这个杂合分子能够在一定的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代分子，此过程叫基因克隆是机体在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。 免疫印迹一种分析和鉴定特定蛋白质的技术用来检测在不均一的蛋白质样品中是否存在目标蛋白的一种方法。即将混杂的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，转移至固相膜(如硝酸纤维素膜、尼龙膜膜等)上特定蛋白质抗体进行免疫反应，显色后可显示该特定蛋白存在表达量。修饰酶能催化稀有碱基参入RNA或DNA，或对原有碱基进行修饰的酶。以防止限制性内切酶的破坏。体内有些酶可在其他酶的作用下，将酶的结构进行共价修饰，而使其在高活性形式和相对较低的活性形式之间互相转变，这种调节称为共价修饰调节，这类酶称为修饰酶例如某些酶的巯基发生可逆的氧化还原，一些酶以共价键与磷酸、腺苷等基团的可逆结合，都会引起酶结构的变化而呈现不同的活性。酶的共价修饰是体内代谢调节的另一重要的方式。 PCR技术（Real-Time PCR）：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，对未知模板进行定量分析的方法。其对PCR扩增反应中每一个循环的产物进行定量分析；特异性强；灵敏度高；可直接对产物进行定量；可解决PCR污染问题；自动化程度高、操作简单。 cDNA文库: 以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库。 DNA文库:DNA 或DNA的所有片断随机地连接到基因载体上,然后转移到适当的宿主细胞中,通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系(克隆),在制备的克隆数目多到可以把某种生物的全部DNA都包含在内的情况下,这一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库色谱过程中携带待测组分向前移动的物质称为流动相与固定相处于平衡状态、带动样品向前移动的另一相用作流动相的物质有气体、液体、超临界流体。是色谱柱内不移动的活性物质称为固定相,是色谱分析中的关键,混合组分的分离,主要取决于固定相的选择。限制性内切酶(restriction endonuclease,RE)是一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸顺序(一般具有双重对称的回文结构),并以内切方式水解双链DNA的核酸水解酶。由水母Aequorea victoria中发现的野生型绿色