Exp08人类CS组型要点.ppt

实验八 人类染色体组型分析 一、实验目的 二、实验原理 CS基数,形态、长度、CEN位置,随体或次缢痕 三项技术: PHA;秋水仙素;低渗处理 组型分析: ①确定物种的CS数目;②辨析每条CS的特征 中期CS的形态结构 人染色体的类型 ①中央CEN: CEN→??? ②亚中CEN: CEN→?-? ③近端CEN: CEN→?-末端 人染色体核型分析标准 A: 1-3﹟CS,体积大,易于区别,中CEN;2﹟的CEN略偏离中央 B: 4-5﹟,体积大,亚中CEN,彼此不易区分 C: 6-12﹟CS、X-CS,中等大小,亚中CEN;6﹟的CEN靠近中央,X-CS大小介于6-7﹟之间;9﹟长臂有次缢痕,11﹟短臂较长,12﹟短臂较短 D: 13-15中等大小,近端CEN,有随体,彼此不易区分 E: 16-18中等大小,16﹟中CEN,长臂有次缢痕,易于区别;17-18﹟亚中CEN,难以区分,后者短臂较短 F: 19-20﹟,体积小,中CEN,彼此难以区分 G: 21-22﹟、Y; 21-22﹟体积小,近端CEN,有随体,长臂常呈分叉状,彼此不易区分;Y略大,近端CEN,无随体,长臂常彼此平行 四、实验步骤 1. 准备CS标本的照片 2. 染色体测量 3. 排列核型图 染色体测量 核型分析计算表 排列核型图 按上述标准及计算结果,将照片上的CS剪贴配对,重新编号 CEN排在同一水平线上,短臂在上,长臂在下 排列好后进行分析比较,确定其核型是否正常 基本步骤 计数, 沿边缘剪下CS,编号 初步目测配对,分组 测量长度,计算相对长度,CEN指数,臂率 排列配对的CS,粘贴在纸上,每组下面画一横线,两端注明起止号,并在横线下的中部写明A-G组号;常CS从大到小编号为1-22号,性CS单独列为一组 * 了解人类CS组型的基本特征 学会CS组型分析的基本方法 三、材料、试剂和器材 人CS显微摄影照片 剪刀,镊子,毫米尺,胶水 T 端部着丝粒 ∞ t 端部着丝粒 7.01?∞ st 近端着丝粒 3.01?7.00 sm 亚中着丝粒 1.71?3.0 m 中着丝粒 1.01?1.70 M 正中着丝粒 1.00 表示符号 着丝粒位置 CS臂率 染色体臂率、CEN位置与CS类型 Y X ︰ 5 4 3 2 1 类型 随体 CEN指数 臂率 长臂 短臂 相对长度 编号 五、作业 1. 完成CS组型分析表 2. 完成CS组型图 植物凝集素(PHA)可以刺激淋巴细胞进行有丝分裂. 在PHA作用下,处在G0期的淋巴细胞可转化成淋巴母细胞,重新进入增殖周期进行有丝分裂; 秋水仙素作为有丝分裂阻断剂,使纺锤体微管解聚,正在分裂的细胞停止在中期,从而获得大量的分裂细胞; 低渗盐溶液 (0.075 mol/L KCl)处理,使细胞充分吸水膨胀,染色体分散,平整地铺展在载玻片上; 对CS照片进行对比分析、CS分组,并对组内各CS长度、CEN位置、臂比和随体的有无特征进行观测和描述,从而阐明人CS组成,确定其CS组型的过程,即CS组型分析.CS组型分析一般采用分散良好、形态清楚而典型的有丝分裂中期的CS标本,少数物种(如玉米)也可利用性母细胞减数分裂的CS标本 中央着丝粒CS(CEN位于CS纵轴的???处),亚中着丝粒CS,近端着丝粒CS 根据丹佛(1960)伦敦(1963)和芝加哥(1966)会议提出的标准,按照染色体的长度依次减小和着丝粒的位置以及其它特征,可把人类体细胞染色体分为七群 人类CS分组特点 准备CS标本的照片 将制作的细胞轮廓清楚,CS集中而不重叠,主、次缢痕和随体清晰,CS长度适中而不弯曲的CS标本,通过显微摄影、冲洗、放大成CS照片 2. CS测量 目测相片上每条CS长度,按长短顺序初步编号,用钢尺逐个测量每条CS长度(总长、长臂长、短臂长),换算出各条CS的相对长度、臂比及着丝粒位置,有随体的CS,其随体长度和次缢痕长度可计入全长,也可不计入,但必须加以说明.将测量和计算的数据分别记录如表1-1和表1-2 3．排列核型图 按上述标准及计算结果,将照片上的染色体剪贴配对,重新编号;着丝粒排在同一水平线上,短臂在上,长臂在下;排列好后进行分析比较,确定其核型是否正常;若要准确细致分析,必须进一步运用染色体显带技术; 用测微尺直接测量中期CS长度: 如果自己的制片很好,可以直接测量,然后统计计算; CS总长度指整个CS组全部CS长度之和 按上述标准及计算结果,将照片上的CS剪贴配对,重新编号;CEN排在同一水平线上,短臂在上,长臂在下;排列好后进行分析比较,确定其核型是否正常;若要准确细致分析,必须进一步运用CS显带技术; 绘制核型模式图 根据前面的计算结果和排列的核型图,用绘图纸和座标纸(座标纸放在绘图纸下面)绘制核型模式图;横座标为CS序