真核生物基因组总DNA的提取与鉴定介绍.pptVIP

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2016-08-04 发布于湖北
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真核生物基因组总DNA的提取与鉴定介绍.ppt

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基因组DNA的分离与纯化一、酚抽提法的原理以含EDTA、SDS的裂解液裂解细胞，经蛋白酶K消化后，用PH8.0的Tris 饱和酚抽提蛋白质，离心后取上层水相，无水乙醇沉淀DNA。二、技术路线破膜提纯沉淀、洗涤细胞膜碎片，细胞器，脂、蛋白质，DNA，RNA 去除脂、蛋白质浓缩DNA、去盐杂质 1.低渗去除红细胞 2.裂解白细胞 3.酚抽提 4.无水乙醇沉淀 5.DNA沉淀的洗涤与干燥 6.DNA溶解与电泳鉴定三结果琼脂糖凝胶电泳鉴定 EB可嵌入到碱基平面，使核酸在 UV 激发下发出桔红色荧光。三结果琼脂糖凝胶电泳鉴定 The End 裂解液的作用裂解液 EDTA SDS Tris -HCl DNA酚抽提法示意图酚的作用酚可以使蛋白质变性沉淀、抑制DNA酶活性。 PH8.0的Tris溶液可以使抽提出的DNA进入水相。 DNA酚抽提法示意图蛋白酶K的作用水解组蛋白，促进DNA与组蛋白的分开。 DNA的沉淀无水乙醇沉淀沉淀前往往加入NaAc等盐离子，作用是中和核酸分子表面的负电荷，有助于分子之间的聚集。无水乙醇可以吸收分子之间的水，使DNA沉淀析出，无水乙醇使用前冰冻，可以减少DNA沉淀析出过程释放热量对DNA的损伤。 TE 10mmol/L Tris-HCl 1mmol/L EDTA 上样缓冲溶液（6 × 或10×）溴酚蓝（电泳指示剂，约相当于300bpDNA）二甲苯氰（电泳指示剂，约相当于4000bpDNA）甘油/蔗糖（增加DNA溶液的密度） 0.5~1.4%琼脂糖凝胶水相的吸取 SDS（去垢剂）