第六章动物人工繁殖要点.ppt

第六章 动物人工繁殖 生物科学与技术学院 动物人工繁殖 动物人工繁殖技术包括有性生殖和无性生殖两条途径。前者的关键技术是人工受精与体外受精，后者的关键技术是核移植，两者都涉及胚胎培养与移植。动物人工繁殖的基础是胚胎工程。 胚胎工程是通过在生殖细胞、胚胎细胞水平上的显微操作技术，来定向控制、改造和创造新遗传性状的技术，是动物细胞工程的拓展和延伸，又称发育工程（revelopmental technology）。 胚胎工程的发展历史 1891年，英国人希普首次在兔子身上成功的进行了核移植。 20世纪30年代，陆续在鼠、兔、羊、猪、牛和马进行胚胎移植实验，相继获得成功。 20世纪60年代以来，随着胚胎移植技术的不断成熟和规范化，以及一系列新方法的建立，胚胎工程进展迅速，以日本、澳大利亚和加拿大发展最快。 1987年，美国用家猫做代理母亲，移植了一只濒临灭绝的珍贵猫的受精卵，成功获得试管猫。 我国自20世纪70年代开始发展该技术，进展也较迅速，但与世界先进国家相比，还存在较大差距。 1977年，英国科学家首次创造了世界上第一个试管婴儿。 体外受精和胚胎移植技术 胚胎移植的发育 早期胚胎发育的三个阶段： 1）桑椹胚 ：卵裂球分裂到16-32细胞时，成为一紧密的细胞团，称为桑椹胚。在2-8个细胞时，每个细胞均具有全能性。 2）囊胚：在胚胎内形成空腔，逐渐变大成为囊胚腔，此时一端细胞个体较大，形成密集（三层）的内细胞团（ICM），将来发育成胚体。另一端只有环透明带一层细胞，称滋养层，将来发育成胚膜。 3）原肠胚：囊胚进一步发育，内细胞团外的滋养层退化，内细胞团裸出形成胚盘，在胚盘下方衍生出内胚层，此时胚胎称原肠胚。 胚胎工程---体外受精（IVF）（第一步骤） 精子获能是精子获得穿透卵子透明带能力的生理过程，是精子在受精前必须经历的一个重要阶段。 精子获能分为体内获能与体外获能 体内获能：精子在附睾内已经获得了受精能力，但由附睾分泌的一种物质附于精子表面，抑制了他的受精能力，这种物质被称为去能因子。去能因子是顶体酶的抑制剂。 体外获能：精子通过用子宫液、卵泡液、子宫内膜提取液或血清等在体外培养获能的过程。 2 、卵子回收及成熟培养 3 、卵子和精子的体外受精（in vitro fertilization IVF） 受精成功的标志至少是看受精卵是否可以发育至囊胚期阶段 4 、受精卵的体外发育及体外培养 体外受精的方式： 1、共培养体外受精 卵子和精子在体外人工环境中共同培养 2、透明带注射法 体外将精子通过微注射器注射入卵细胞的透明带下的卵间隙中使卵细胞受精。 3、卵浆内精子注射法 体外将精子通过微注射器注射入卵细胞的细胞质中使卵细胞受精。 4、透明带修饰法 人工破坏卵细胞的透明带。 胚胎工程---胚胎移植（ET）（第二步骤） 胚胎移植（embryo transfer）指从某个体采胚或将试管内的受精卵（8细胞以上或囊胚期）移植到另一个体的输卵管或子宫中去的技术。 提供胚胎或受精卵的母体称为“供体”。 接受胚胎或受精卵的母体称为“受体”，又称“代孕母体”或“代理母亲”。 来自供体的胚胎能够在受体的子宫着床，并继续生长和发育，最后产下供体的后代，即是所谓的“借腹怀胎”。 荷尔蒙FSH(促卵泡激素) 人工环境下通过药物（FSH）刺激卵巢分泌产生卵细胞 超数排卵：在母畜发情周期的适当时间用人工方法促使其有更多的卵泡发育、成熟、排卵的一项技术。 方法是注射促性腺激素，如孕酮、雌二醇、促卵泡激素、促黄体激素、促性腺激素释放激素等。 LH是黄体生成素，HCG是促绒毛性腺激素 超排卵处理的母体在停药后24-48小时后可进行人工受精，以后约在3-7天从母体采集受精卵或胚胎。 体外受精 生殖核 胚囊 胚胎的采集、鉴别 正常发育的胚胎，其中细胞(卵裂球)外形整齐，大小一致，分布均匀，外膜完整。 无卵裂现象(未受精)和异常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能用于移植。 精子获能 胚胎移植 同步发情 指使供体和受体同步发情，即处于相同的生殖周期。 胚胎移植 外科手术法或非手术法 胚胎冷冻保存技术：在冷冻细胞的基础上发展起来的，包括精子、卵母细胞和早期胚体的冷冻保存。 1、短期临时保存：指将暂时不使用的胚胎在37℃培养液中保存，或在活体同种或异种动物的输卵管内保存1-2天。也可将胚胎置0-4℃低温下保存2-3天。 2、长期冷冻保存：有仪器程序逐步降温冷冻和徒手操作的快速玻璃化冷冻。前者利用冷冻仪按编程由室温逐步降温至零下196℃（液氮）保存。所用冷冻剂一般为二甲基亚砜、氨基酸、甘油等。后者是直接加入高浓度的抗冻液（玻璃化冷冻保护液）急速冷冻，有液体转化为透明胶状固体。 试管婴儿 1977年7月25号世界上第一例试管婴儿——路易丝.布朗在英国