分子生物学-5要点.ppt

第六部分 分子生物学技术 分子克隆技术 (重组 DNA 技术、基因工程) 核酸分子杂交技术 DNA 测序技术 PCR 技术 RNA 干扰技术 蛋白质分析技术 常用的分子生物学技术 DNA、基因及基因组测序 特定基因的克隆、表达及功能鉴定 基因表达调控序列的克隆和鉴定 药物研发及药物生产 基因治疗 疾病相关基因的检测 病原微生物的检测 DNA 指纹分析 重组病毒疫苗、DNA 疫苗 基因敲除动物模型的建立 转基因动物及转基因植物的建立　 利用微生物的能源生产及环境废物处理 分子生物学技术的应用 /genome/ 利用大肠杆菌生产人胰岛素 发酵装置 人胰岛素 突变的基因 动物 rheb C57BL/6 小鼠 gpr55 FVB/N 小鼠 lepr C57BL/6 小鼠 wdr20a C57BL/6 小鼠 mc3r Sprague Dawley 大鼠 mc4r Sprague Dawley 大鼠 lepr Sprague Dawley 大鼠 基因敲除动物模型 影响毛发生长的基因敲除小鼠 转基因动物 利用转基因动物 (如羊、牛)生产蛋白药物，如组织纤溶酶原激活剂 (tPA)、乳铁蛋白、人类-1 抗胰蛋白酶、促红细胞生成素 (EPO) 等。 建立转基因小鼠及大鼠疾病模型，用于心血管疾病 、遗传病、肿瘤学和免疫学等研究。 1982年在美国建立的 第一个转基因小鼠模型 普通棉花 转基因棉花：抗病虫害 转基因植物 重组病毒疫苗 DNA 疫苗 DNA 疫苗是将含有某种抗原基因序列的载体作为疫苗，直接导入动物细胞内，通过宿主细胞的转录、翻译系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答。 例如，含乳腺球蛋白-A 编码基因的 DNA 疫苗。 对 Thermoanaerobacterium saccharolyticum 厌氧嗜热杆菌进行遗传改造，即删除与有机酸生成有关的基因 (如乙酸激酶、磷酸乙酰基转移酶、乳酸脱氢酶)，对木聚糖和来源于生物质的糖发酵，生产高产量乙醇。 Shaw AJ, et al. Metabolic engineering of a thermophilic bacterium to produce ethanol at high yield. PNAS 2008, 105(37):13769-13774. 利用工程菌生产乙醇 对大肠杆菌的脂肪酸生物合成途径进行遗传改造，以获得短链脂肪酸；通过引入一种新的合成途径和培养条件的优化，使短链脂肪酸转换到其相应的烷烃 (汽油)。 目前正在尝试提高短链脂肪酸的产率及生物汽油的产量。 利用工程菌生产生物汽油 Lee SY and Choi YJ. Microbial production of short-chain alkanes. Cell 2013. doi:10.1038/nature12536 生产短链烷烃的大肠杆菌工程菌 分子克隆技术 大肠杆菌基因组 人类基因组 真核细胞的基因及 cDNA cDNA DNA 目的 DNA 片段 分子克隆 (Molecular cloning): 产生许多相同的 DNA 分子的过程。 分子克隆 (Molecular cloning) 基因组 DNA 载体 限制性内切酶酶切 限制性内切酶酶切、电泳分离、纯化 DNA 连接酶 重组载体 转化或转导 大肠杆菌宿主细胞 细菌增殖 分 子 克 隆 的 基 本 过 程 重组载体在大肠杆菌宿主细胞中复制以产生许多相同的 DNA 分子拷贝 Route to the Production by Bacteria of Human Insulin 完成分子克隆所需的条件 载体 目的 DNA 或 cDNA 宿主细胞及导入重组 DNA 分子到宿主细胞的手段 工具酶 (限制性内切酶、DNA 连接酶、修饰酶) 阳性克隆的筛选方法 克隆载体 用于构建基因组文库、cDNA 文库以及克隆某一特定基因或 cDNA 以测定其核苷酸序列。 表达载体 用于表达某一基因或 cDNA 以获得目的蛋白。 载体 (Vectors) 和宿主细胞 (Host cells) 载体 功能分析 结构分析 药物筛选 临床药物 克隆目的基因或 cDNA到克隆载体 亚克隆目的基因或 cDNA 到表达载体 高表达目的蛋白 基因治疗 一、克隆载体 (Cloning vectors) 用于构建基因组文库、cDNA 文库以及克隆某一特定基因或 cDNA 以测定其核苷酸序列。 克隆质粒 (cloning plasmid) ? 噬菌体载体 (? phage) 粘粒