第八章生长繁殖汇总.ppt

第八章微生物的生长繁殖及其控制 第一节 微生物生长的研究方法 一、微生物的分离纯化方法： （1）平皿划线法 （2）稀释倒平皿法 （3）稀释涂布法 （4）选择培养基分离法 （5）单细胞挑取法 （6）利用环境条件控制法 二、实验室培养法 固体培养法 好氧菌的固体培养：试管、平皿、三角瓶 厌氧菌的固体培养 高层琼脂柱 厌氧培养皿 Hungate rool-tube technique 厌氧罐技术 厌氧手套箱技术 液体培养法 好氧菌的液体培养 厌氧菌的液体培养 试管液体培养 三角瓶浅层液体培养 台式发酵罐 摇瓶培养 Brewer 皿 高层琼脂柱 亨盖特技术 培养厌氧菌的试管及平皿 Anaerobic Glove Box 三、生产实践中培养微生物 固态培养法 好氧菌-曲法培养 厌氧菌的堆积培养 深层液体通气培养—— 发酵罐（Fermenter） 液体培养法 浅盘培养 三、测定生长繁殖的方法 既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定生长的方法也都直接或间接地以此为根据，而测定繁殖要建立在计数这一基础上。 一、微生物细胞数目的测定 （一）比浊法 细菌培养物在其生长过程中，由于原生质含量的增加，会引起培养物浑浊度的增高。 如果要作精确测定，则可用分光光度计进行。 在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度(opticaldensity, 即O.D.)表示菌量。 实验测量时应控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。 直接计数法只适用于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子。 1、比例计数法 将已知颗粒浓度的样品（例如血液）与待测细胞细胞浓度的样品混匀后在显微镜下根据二者之间的比例直接推算待测微生物细胞浓度。 （二）直接计数法 直接法就是指在显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法，所得的结果是包括死细菌在内的总菌数。 采用细菌计数板或血球计数板，在显微镜下对微生物数量进行直接计数（计算一定容积里样品中微生物的数量） 缺点： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 2、血球计数板法 用来测定一定容积中的细胞总数目的常规方法。 （三）平板菌落计数法 一种活菌计数法，是根据活细胞通过生长繁殖会在平板培养基表面形成菌落的原理而设计的方法。 对未知样品进行一系列十倍稀释，然后取一定体积的稀释菌液涂布于琼脂平板上，保温培养直到菌落出现，记录菌落数目并换算成每毫升试样中的活细胞总数。 它是一种最常用的活菌计数法 采用培养平板计数法要求操作熟练 、准确，否则难以得到正确的结果： 样品充分混匀； 每支移液管及涂布棒只能接触一个稀释度的菌液； 同一稀释度三个以上重复,取平均值； 每个平板上的菌落数目合适，便于准确计数； 涂布平板法和稀释倒平板法 一个菌落可能是多个细胞一起形成，所以在科研中一般用菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示，而不是直接表示为细胞数。 以上介绍了若干测定微生物的生长繁殖数的主要方法，其中，最常用的为测浊度（用分光光度计）、用计数板测总菌数以及用平板菌落计数法测活菌数等方法。 在使用前，一定要根据自己的研究对象和研究目的的不同，选用最合适的方法。 3、测含氮量 根据样品中菌体蛋白质含量计算微生物重量的方法。氮是蛋白质的稳定成分 (蛋白质量=6.25×总含N量) 4、测含碳量 5、其他（例如：磷、DNA、RNA等） 1、湿重法 2、称干重 可用离心或过滤后干燥，称重，一般干重为湿重的10~20%。 二 、测定生物量和生理指标 与生长量相平行的生理指标很多，它们都可用作生长测定中的相对值。 微生物的生理指标，如呼吸强度，耗氧量、酶活性、生物热等与其群体的规模成正相关。 样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显，因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量热计等设备来测定相应的指标。 常用于对微生物的快速鉴定与检测 生物个体物质有规律地、不可逆增加，导致个体体积扩大的生物学过程。 生长： 生物个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。 繁殖： 生长、繁殖就是保证微生物获得巨大数量的必要前提 第二节 微生物的生长规律 微生物的生长表现在微生物的个体生长和群体生长两个水平上。 个体生长 个体繁殖 群体生长 在微生物学中提到的“生长”，一般均指群体生长，这一点与研究大生物时有所不同。 在一定时间和条件下细胞数量的增加（微生物群体生长） 微生物生长: 一、个体生长和同步生长 要研究单个细菌细胞内,所发生的生物化学变化和细胞学变化,目前使用的方法: 一是用电子显微镜观察细菌细胞的超薄切片 二是使用同步培