菊花的组织培养(修改版)要点.ppt

经过栽培，此植株能够正常生长并开花结果，其种子繁衍出来的后代与正常植株的种子所繁衍出的后代别无二致。根据此实验可以得出以下结论：即不经过有性生殖过程也能将植物的薄壁细胞培养出与母体一样的完整植株。由于植物的每个有核细胞都携带着母体的全部基因，故在一定条件下，它们均能发育成完整植株，这就是所谓的植物细胞全能性。 结果分析： 外植体污染原因 1）培养材料的取材应很好的加以选择，老的材料比幼嫩的材料带菌多，田间比温室生长材料带菌多。 2）消毒材料不彻底，植物组织只能进行表面灭菌，对材料内部所带的细菌霉菌等杂菌往往难以对付，可在培养基中添加抗生素解决。 3）人为污染，如使用未消毒工具或呼吸排除细菌;未消毒手接触材料或器皿边缘；使用过的工作器具未消毒而再继续使用，造成交叉污染等。 生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）等。 细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤（ 6－BA）、玉米素（ZT）等。 赤霉素类： 赤霉酸（GA3）等 作用：抑制幼芽的生长，诱导根的分化 2，4－D有利于愈伤组织的生长； IAA、NAA、IBA有利于器官分化。 作用：促进细胞的分裂与分化，其中KT能 明显促进芽的分化而抑制根的形成。 作用：促进不定芽和幼株伸长。 使 用 顺 序 实 验 结 果 使 用 比 例 实 验 结 果 生长素 细胞分裂素 生长素 细胞分裂素 生长素 细胞分裂素 ＝ 有利于根的分化，抑制芽的形成 有利于芽的分化，抑制根的形成 促进愈伤组织的形成 激素的使用顺序、使用量及比例影响植物细胞的发育方向： 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但不利分化 先使用细胞分裂素，后使用生长素 同时使用 细胞既分裂也分化 分化频率提高 菊花的组织培养程序： 制备MS固体培养基 外植体消毒 接种 培养 移栽 栽培 实验流程图： 课外拓展 MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。 基于此，这种培养基就用他们的名字来命名了。 MS培养基主要成分： ①大量元素: N、P、 K、 Ca、 S 、 Mg等 ②微量元素: B、Mn、Cu、Zn、 　　　　　 Fe、Mo、I、Co等 ③有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、 维生素、蔗糖等 ④植物激素：生长素、细胞分裂素、 赤霉素等 微生物培养基的配方和MS培养基的配方相比，有哪些明显的不同？ 微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同， MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。 （一）制备MS固体培养基： MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备。 1．配制各种母液： ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩 100倍，常温保存。 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一 般可按1mg/mL的质量浓度单独配制成母液。 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的 浓缩倍数，计算用量。 实验操作 2．配制培养基： 分装到锥形瓶中，每瓶分装50mL或100mL。 ① 配制培养液：配制1LMS培养基时，先将称好的琼 脂加入800mL蒸馏水，加热使琼脂熔化，然后加入 蔗糖30g，取配制好的大量元素、微量元素、有机 物和植物激素的母液，依次加入，加蒸馏水定容 至1000mL。 ② 调pH：5.8左右 ③培养基的分装: 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因 此不必添加植物激素。 3．灭菌： 将分装好的培养基连同其他 器械一起进行高压蒸汽灭菌。 1．选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝。 （二）外植体消毒： 2．消毒： ① 流水冲洗： 菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。 ② 酒精处理： 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2～3次，持续6～7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。 ③ 消毒液处理： 取出后用无菌吸水纸