聚合酶链反应要点.ppt

聚合酶链反应 和 琼脂糖凝胶电泳 丁洁 2014.10.24 实验目的： 1. 了解聚合酶链反应的定义、原理和方法。 2. 学会利用聚合酶链反应体外扩增核酸。 3. 掌握琼脂糖凝胶电泳的原理、方法。 4. 学会PCR仪和UVP凝胶成像系统的使用。 实验原理： 聚合酶链式反应（英文全称：Polymerase Chain Reaction，PCR），是体外酶促反应合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增。 PCR原理示意图 实验原理： 通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。 基本反应步骤构成： 1.模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； 2.模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合； 3.引物的延伸：