第4章酶工程制药总结.pptVIP

核酶的分类 自1982年以来，被发现的核酸类酶越来越多，对它的研究也越来越深入和普遍。但是由于历史不长，对于其分类和命名还没有统一的原则和规定。 但根据酶催化反应的类型，区分为分子内催化R-酶和分子间催化R-酶， 根据作用方式将R-酶分为3类：剪切酶、剪接酶和多功能酶。 （1）分子内催化R-酶 是指催化本身RNA分子进行反应的一类核酸类酶。是最早发现的R-酶。均为RNA前体。由于这类酶是催化本身RNA分子反应，冠以“自我”（self）字样。 根据酶所催化的反应类型，可以将该大类酶分为两个亚类。 ①自我剪切酶（self-cleavage ribozyme） 是RNA的前体。它可以在一定条件下催化本身RNA进行剪切反应，使RNA前体生成成熟的RNA分子和另一个RNA片段。 ②自我剪接酶（self-splicing ribozyme） 是在一定条件下催化本身RNA分子同时进行剪切和连接反应的R-酶。也是RNA前体。它可以同时催化RNA前体本身的剪切和连接两种类型的反应。根据其结构特点和催化特性的不同，该亚类可分为两个小类， （2）分子间催化R-酶 是催化其他分子进行反应的核酸类酶。根据所作用的底物分子的不同，可以分为若干亚类。 ①RNA剪切酶。 ②多功能R-酶 是指能够催化其他RNA分子进行多种反应的核酸类酶。 ③作用于DNA的R-酶 1990年，发现有些R-酶还可以DNA为底物，在一定条件下催化DNA分子进行剪切反应。 ④作用于多糖的R-酶 该亚类的酶是能够催化多糖分子进行反应的核酸类酶。兔肌1，4--D-葡聚糖分支酶 [EC 2. 4.1.18]是一种催化直链葡聚糖转化为支链葡聚糖的糖链转移酶，分子中含有蛋白质和RNA。其RNA组分由31个核苷酸组成，该RNA可以催化糖链的剪切和连接反应，属于多糖剪接酶。 ⑤作用于氨基酸酯的R-酶 1992年，发现了以催化氨基酸酯为底物的核酸类酶。该酶同时具有氨基酸酯的剪切作用、氨酰基-tRNA的连接作用和多肽的剪接作用等功能。 酶的人工模拟 一、模拟酶的概念 二、模拟酶的理论基础 三、模拟酶的分类 四、人工模拟酶的研究意义 一、模拟酶的概念 根据酶的作用机理，用人工方法合成的具有酶性质的催化剂，简称人工酶或模拟酶。 特点：高效、高适应性、结构比天然酶相对简 单，蛋白质或非蛋白质 二、模拟酶的理论基础 1. 模拟酶的酶学基础： Pauling的稳定过渡态理论：酶先与底物结合，进 而选择性的稳定某一特定反应的过渡态，降低反 应活化能（底物的定向化、键的扭曲及变形）， 从而加快反应速度。 2.主-客体化学和超分子化学 美国化学家Cram把主体和客体通过配位键或其他次级键形成稳定复合物的化学领域称主-客体化学，主体和客体（酶和底物）在结合部位的空间及电子排列的互补。 主-客体化学的基本思想：具有显著“识别能力”的某些冠醚可以作为主体，有选择性的与作为客体的底物发生配合，旨在模拟酶和底物的作用。 法国科学家Lehn的“超分子化学”：首先要求合成具有特定结构的分子作为接受体。接受体应具有选择络合离子和分子结构形式的能力，又使底物可借各种分子内作用与受体结合，导致“分子的聚集”，这种聚集后的分子Lehn称其为“超分子”。 “超分子化学”就是分子内键合和分子聚合的化学。“超分子”兼有分子识别，分子催化和选择 性迁移等功能。 三、模拟酶的分类 根据Kirby分类法 单纯酶模型：以化学方法通过天然酶活性的模拟来重建和改造酶活性； 机制酶模型：通过对酶作用机制诸如识别、结合和过渡态稳定化的认识，来指导酶模型的设计和生产； 单纯合成的酶样化合物：化学合成的具有酶样催化活性的简单分子。 按照模拟酶的属性可分为： 主-客体酶 胶束酶 肽酶 半合成酶 分子印迹酶 1.主-客体酶 环糊精(CD)是天然存在 的、类似酶的理想宿主分子， 本身具有酶模型的特性。略呈 锥形的圆筒结构，外侧亲水， 其羟基可与多种客体形成氢 键，内侧的空腔具有疏水性， 能包结多种客体分子，类似酶 对底物的识别。 人工合成的宿主分子，具有酶模型的特性。如冠醚、穴醚、环番、杯芳烃等大环多齿配体。具有底物识别能力和催化基团。 2. 胶束酶 胶束在水溶液中提供了疏水微环境（类似于 酶的结合部位），可以对底物束缚，如果将催化 基团如咪唑基、巯基、羟基和一些辅酶共价或非 共价的连接或吸附在胶束上，就有可能提供“活性 中心”部位，使胶束成为具有酶活力或部分酶活力 的胶束模拟酶。 3. 肽酶 肽酶就是模拟天然酶活性部位而人工合成的 具有催化活性的多肽，这是多肽合成的一大热点。 4. 半合成酶 以天然酶为母体，用化学方法或基因工程方 法引进适当的活性部位或催化基团