细胞与原生质体培养要点.pptxVIP

10 植物细胞培养 10.1 细胞培养的概念及种类 10.1.1 概念 植物细胞培养（plant cell culture）是指对游离的植物细胞或细胞小聚体进行的离体无菌培养。 Cell culture for UV-elicitation in a Petri dish 10.1.2 种类 根据培养规模: 小规模培养和大批量培养； 根据培养方式: 悬浮培养、单细胞培养等； 根据要求产物: 用于诱变的细胞培养和生产次生产物的细胞培养。 Cell cultures for UV-elicitation, one day before UV exposure 10.2 细胞的悬浮培养 （1）概念：是指将植物的细胞和细胞小聚体悬浮在液体培养基中进行培养，使之在体外繁殖、生长、发育，并在培养过程中能保持很好的分散性的技术。 （2）来源：愈伤组织、某个器官或组织，甚至幼嫩的植株。 Shaker for suspension culture Culture wheel? （3）特点： 细胞可以不断增殖，形成高密度的细胞群体，适于大规模培养； 能够提供大量较为均匀的细胞，为研究细胞的生长、分化创造方法和条件。 由培养愈伤组织中游离单细胞 （4） 单 细 胞 的 游 离 由培养愈伤组织中游离单细胞 由完整植物器官中分离单细胞 机 械 研 磨 法： 研磨法 分离植物 单细胞程序 图 酶法分离植物细胞的程序 由完整植物器官中分离单细胞 果 胶 酶 分 离 法： （5）悬浮细胞培养方法 分批培养：把植物细胞分散在一定容积的培养基中进行培养，在培养过程中除了气体和挥发性代谢产物可以同外界交换外，一切都是密闭的，当培养基中的主要营养物质耗尽时，细胞的分裂和生长即行停止。 连续培养：利用特制的培养容器进行大规模细胞培养的一种培养方式。 在连续培养中，由于新鲜培养基的不断加入，同时旧培养基不断排出，因而，在培养物的容积保持恒定的条件下，培养液中的营养物质能够得到不断补充，使培养细胞能够稳定连续生长。 10.3 单细胞培养 （1）概念：是指从植物器官、愈伤组织或悬浮细胞培养液中游离出单个细胞，于无菌条件下，进行体外培养，使其繁殖、生长、发育的一门技术。 （2）分离： 由完整的植物器官分离单细胞 由培养组织中分离单细胞 ①由完整的植物器官分离单细胞---- 叶片是分离单细胞的最好材料 --机械法 --酶解法 机械法:第一种方法：用刀片刮叶片 第二种方法：叶片研碎、离心 酶解法: Takebe等（1968）最早报道：用果胶酶处理可以分离大量的叶肉细胞 ②由培养组织分离单细胞 茎段 步骤： 诱导产生愈伤组织； 愈伤组织反复继代，使组织不断增殖，提高愈伤组织的松散性； 摇床用于振荡 （Suspension culture)将愈伤组织在液体培养基中培养，建立悬浮培养物。 15ml medium/1g 120rpm culture transfer 1time/3d 3 weeks 100-130目网过滤 Centrifuge(离心） isolation （3）植物单细胞培养方法 ①看护培养（nurse culture），也称饲喂层培养（feeder layer technique），是指用一块愈伤组织或植物离体组织看护单细胞使其生长并增殖的一种单细胞培养方法。 ②平板培养：将悬浮培养的细胞接种到一薄层固体培养基中进行的培养称之为平板培养 1. 具一定密度的细胞悬浮液；2. 冷却到35℃的琼脂培养基； 3.悬浮细胞与35℃的液体琼脂培养基混合；4. 倒入无菌培养皿中制成平板。5.在25℃条件下培养21d形成单细胞无性系 ③微室培养：是指将含有单细胞的培养液小滴滴入无菌小室中，在无菌条件下，使细胞得以生长和增殖，形成单细胞无性系的培养方法。 10.4 植物细胞培养的应用 10.4.1 植物细胞次生物质的生产 植物细胞的次生物质：主要是指那些由植物细胞产生的、对其生存不起或很少起作用的特定化合物。 表10-2 几种植物天然产物的来源和用途（引自Chawla，2002） 化合物 植物种类 用途 除虫菊酯 茼蒿（Chrysanthemum cincerarie folium） 杀虫剂 万寿菊（Tagetus） 杀虫剂 长春碱、阿马里斯 长春花（Catharanthus roseus） 抗肿瘤 奎宁 正金鸡纳树（Cinchona officinalis） 抗疟药 地高辛、利血平 狭叶毛地黄（Digitalis lanlata） 强心剂、强胃剂 茉莉油 茉莉（Jasmium spp） 香水 甜菊苷 甜叶菊（Stevia rebaudiana） 甜味剂 藏花素，苦藏花素 番红花