微生物大实验方案要点.docVIP

土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选 及淀粉酶活力的测定 摘要：从土壤中筛选能够产生淀粉酶的芽孢杆菌并测定其所产淀粉酶活力；首先通过所选土样进行梯度稀释，再根据淀粉酶选择培养基筛选出能够产淀粉酶菌株，再进行纯培养，进而通过结合镜检、生理生化试验结果，查阅博杰细菌手册确定其该菌种属；另一方面，通过种子培养基对菌种进行活化，活化后对其进行发酵培养，进而获得粗酶液；用3, 5—二硝基水杨酸显色法对发酵培养粗酶液淀粉酶活力进行精确测定。 关键词：土壤、产淀粉酶、芽孢杆菌、酶活力 前言：芽孢杆菌产淀粉酶是工业用淀粉酶的一个重要来源，因此获得产高活力的淀粉酶菌株对于淀粉酶行业来说非常重要；另一方面，通过对获得产淀粉酶的芽孢杆菌以及测定淀粉酶活力这个大实验，不仅仅有效提高我们同学的实验能力，另一方面也加强了同学们之间的相互认识以及团队合作能力。 实验目的： （1）了解微生物分离纯化的原理及微生物分离纯化常用方法和技术； （2）掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理及方法； （3）掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力测定的原理及方法； （4）培养学生自行设计实验流程、综合分析解决问题及判断实验结果的能力； （5）对所学习过的微生物实验方法进行综合技能训练； （6）从不同环境土壤样品中筛选出能产淀粉酶的芽孢杆菌，并分析比较各产淀粉酶菌株 的产淀粉酶活力及总结各芽孢杆菌在土壤中的分布情况。 材料、试剂及仪器： 材料： （1）：土壤样品：用五点法取样，选取生化楼下和广州大学缪老师温室蓬附近5cm-10cm土层土样。 （2）：培养基：（制备好都要进行高压灭菌锅121℃，灭菌20min,属于前期工作） ：葡萄糖蛋白胨培养基（V.P试验用）（%）： 葡萄糖0.5 蛋白胨0.5 氯化钠0.5 pH 7.27.4 ：蛋白胨水培养基（吲哚试验用）（%）： 蛋白胨1.0 氯化钠0.5 PH 7.2～7.4 ：糖发酵培养基（产酸产气用）（%）： 糖酵解培养基(葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖)(%):蛋白胨0.2 氯化钠0.5 K2HPO40.02 1.6%溴甲酚紫0.2 糖1.0 (pH7.0~7.2) 乳糖发酵培养基：蛋白胨0.2 氯化钠0.5 K2HPO4 0.02 1.6%溴甲酚紫0.2 乳糖1.5 pH 7.2~7.4 ：淀粉培养基（%）：牛肉膏0.5 蛋白胨1.0 氯化钠0.5 可溶性淀粉0.2 琼脂2.0 pH 7.2~7.4 ：淀粉选择培养基（%）：可溶性淀粉2.0 NH4NO3 0.2 K2HPO4 0.2 MgSO4·7H2O 0.05 KCl 0.05 酵母粉0.1 琼脂1.5 pH自然 ：液体发酵培养基（%）：玉米粉 2 黄豆饼粉 1.5 CaCl 0.02 MgSO4 0.02 NaCl 0.25 K2HPO4 0.2 柠檬酸钠 0.2 硫酸氨0.075(溶解后加) Na2HPO40.2 校正pH值7.0 ：种子培养基：可溶性淀粉 0.5%、牛肉膏0.5%、蛋白胨l%、NaCl 0.5%、pH 7.2~7.4 耐盐培养基(%): 蛋白胨1 牛肉膏0.3 氯化钠2 琼脂1.5 ～2.0 蒸馏水 蛋白胨1 牛肉膏0.3 氯化钠5 琼脂1.5 ～2.0 蒸馏水 蛋白胨1 牛肉膏0.3 氯化钠7 琼脂1.5 ～2.0 蒸馏水 蛋白胨1 牛肉膏0.3 氯化钠10 琼脂1.5 ～2.0 蒸馏水 酪素水解培养基: 5g脱脂奶粉,50mL蒸馏水；1.5g琼脂,50mL蒸馏水.分开灭菌,现配现用. 运动性穿刺培养基(%):蛋白胨1 牛肉膏0.3 氯化钠0.5 琼脂0.4-0.6 蒸馏水(pH7.2~7.4) 西蒙氏柠檬酸盐培养基氯化钠硫酸镁(MgSO4·7H2O)磷酸二氢铵磷酸氢二钾柠檬酸琼脂2溴麝香草酚蓝溶液4pH6.8 营养明胶培养基（%）：蛋白胨 0.5、牛肉膏0.3、明胶1.2，调pH 6.8~7.0 酪氨酸水解培养基:5%2-酪氨酸10mL 营养琼脂100mL.用时再混匀 苯丙氨酸培养基（%）：酵母浸膏0.3 NaCl 0.5 苯丙氨酸 0.1 琼脂 1.2 磷酸氢二钠 0.1 定容100mL 牛肉膏蛋白胨培养基: 牛肉膏 0.5g 蛋白胨1.0g 琼脂1.5-2.0 NaCl 0.5g 水100mL pH 7.2~7.4 ⑥　硝酸盐培养基成分：硝酸钾 0.2g 蛋白胨5g 蒸馏水　 1000mL pH7.4 试剂： 简单 染色： 草酸铵结晶紫染色液 革兰氏 染色：草酸铵结晶紫染色液、