微生物血球计数板直接计数法要点.pptVIP

微生物血球计数板直接计数法 一、目的要求 二、基本原理： 此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行测定。它观察在一定的容积中的微生物的个体数目，然后推算出含菌数，包括死活细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。 这样得出结果往往偏高。这种方法常用于形态个体较大的菌体或孢子。 计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。 计数室刻度有2种：一种是25中格× 16小格，而另一种为16中格× 25小格，它们都是由400个小格组成。每个大方格边长1mm，则每个大方格面积为1 × 1=1mm2。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为0.1mm,所以每个计数室(大方格)的体积为0.1 × 1 × 1=0.1mm3,每个大格有400个小格，所以每个小方格体积0.1/400=1/4000mm3=1/4000,000ml。 血球计数板的分区与分格 例一 例二 1大格=16中格 1大格=25中格 =16 X 25小格 =25 X 16小格 =400小格 =400小格 三、材料与仪器： 1、待测样品：灵芝孢子粉菌悬液 2、显微镜，血球计数板，接种环,盖玻片等。 四、方法与步骤: 1、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上盖玻片。 2、取稀释到一定程度（3－4个/小格）孢子数，从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不能有气泡。静置约5min，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察并计数。 3、如用16 × 25计数板，只计四个角上中方格的菌数。若是25 ×16的计数板，除计数四个角上的中格菌数外，还要计算中央中格的菌数。每个样品重复计数2~3次。计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线。以减少误差。 4、计数方法： 设：每个中方格的菌数为A，则 每小格平均菌数=（A1+A2+A3+A4+A5)/80 样品中菌数/ml=每小格平均菌数 ×4000 × 1000 ×稀释倍数 本实验采用25 x 16规格，要求数这些方格中的全部小格即80个小格。 结果记录： 微生物名称 总菌数 个/ml 四、测定注意事项: 测定时，菌液要摇匀，防止菌液凝聚沉淀。 五、思考题： 1、用血球计数板计数时，哪些步骤易造成误差？ 2、血球计数板测定原理是什么？它有哪些优点？ * 显微镜直接计数法 使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。 优点：操作简便，计数直观。活菌,死菌都计在内,与微生物大小相同的杂质也计在内. * * * * # # # # # 平均 第二次 测定 第一次 测定 第五个 中格 第四个 中格 第三个 中格 第二个 中格 第一个 中格 *