兽用生物制品研发与申报培训要点.pptVIP

兽用生物制品研发与申报培训 根据中监所培训资料改编 培训目录 一、菌（毒）种种子批建立试验 二、实验室安全试验 三、实验室效力试验 四、诊断制品试验研究 五、相关法律法规 一、菌（毒）种种子批建立试验 原始种子 种子批分为三级 基础种子 生产种子 1 原始种子 比较难界定，没有一个确切的模式。 灭活疫苗的原始种子应该是从动物体内分离、纯化、适应、鉴定的培养物，或朋友馈赠的经过一定的工作确定用来制苗的最早培养物为原始种子。 如：AIV（H9亚型）灭活疫苗，从病死鸡气管黏液用PBS制成悬液、离心取上清加双抗、接种鸡胚分离病毒，经鉴定后即为原始种子。 2 种子批定义原始种子定义 原始种子 基础种子批定义 基础种子 生产种子批定义 生产种子 3 种子批的建立原始种子批的建立 种子批建立原则是对选定的菌（毒）株进行纯培养，并将培养物分成一定的数量、装量和成分一致的小包装，于液氮中或其他适宜条件下保存。 细菌类种子批应对原始种子进行形态和生化特性、培养特性、血清学鉴定、安全性（活疫苗）或毒力（灭活疫苗）、免疫原性、纯粹等鉴定。 病毒类种子批应对原始种子进行病毒含量、安全性（活疫苗）或毒力（灭活疫苗）、免疫原性、特异性以及纯净（细菌、支原体或外源病毒）等鉴定。 基础种子批建立 基础种子由原始种子经适当方式传代扩增而来，增殖到一定数量后，将相同代次的所有培养物均匀混合成一批，定量分装，保存于液氮中或其他适宜条件下备用。按照规定项目和方法进行系统鉴定合格后，方可作为基础种子使用。基础种子批应达到足够的规模，以便能够保证相当长时间内生产的需要。 基础种子代次的确定：通常情况下，将基础种子传代至规定最高代次以上第3代，取不同代次水平的培养物进行含量、免疫原性试验，考察其繁殖特性和免疫原性的稳定性。必要时，还须考察基础种子的遗传稳定性。 生产种子批的建立 生产种子由基础种子经适当方式传代扩增而来，达到一定数量后，均匀混合，定量分装，保存于液氮中或其他适宜条件下备用。根据特定生产种子批的检验标准逐项（一般应包括纯净性检验、特异性检验和含量测定等）进行检验，合格后方可用于生产。并须确定生产种子在特定保存条件下的保存期。 生产种子批应达到一定规模，并含有足量活病毒（或细菌），以确保能满足生产一批或一个亚批产品。 4 基础种子的鉴定 基础种子鉴定 （1）生物学特性鉴定 细菌、支原体类：形态和培养特性、生化特性、血清学特性。 病毒类：血清学特性。 （2）含量测定 应尽量采用通行方法，并应确保在全部试验过程中采用相同的测定指标： 半数感染量ID50 半数鸡胚感染量EID50 半数致死量LD50 半数鸡胚致死量ELD50 半数细胞培养物感染量TCID50 最小感染量MID 最小致死量MLD 病毒蚀斑形成单位PFU 荧光病灶单位FFU 菌落形成单位CFU 支原体变色单位CCU （3）安全或毒力试验 安全性或毒力试验：主要考察基础种子对靶动物的致病性（灭活疫苗）和安全性（活疫苗），为制定相应标准提供依据并为今后的生产和检验过程中应采取的安全措施提供依据。 活疫苗安全性试验：包括用多大的剂量对敏感日龄的靶动物或实验动物是安全的。 灭活疫苗毒力试验：同样包括用多大的剂量对敏感日龄的靶动物或实验动物能致死或发病或流产。 基因工程类活疫苗应按照《农业转基因生物安全管理条例》和《农业转基因生物安全评价管理办法》有关规定进行安全性或稳定性试验，基因工程类灭活疫苗可以同时申报。 （4）免疫原性（或最小免疫剂量）试验 基础种子免疫原性测定：应分别用基础种子的最低代次和最高代次进行最小免疫剂量测定，以便决定基础种子的使用代次。当然也包括基础种子的