代谢工程与调控第二章概念.pptx

代谢工程与调控 孙新晓 sunxx@mail.buct.edu.cn 代谢 代谢是生物体内所发生的用于维持生命的一系列有序的化学反应的总称。它包括物质代谢和能量代谢两个方面。 物质代谢：是指生物体与外界环境之间物质的交换和生物体内物质的转变过程。 能量代谢：是指生物体与外界环境之间能量的交换和生物体内能量的转变过程。 合成代谢和分解代谢 代谢工程与调控 代谢网络 微生物自身代谢调控 微生物代谢网络的工程改造 细胞生长 是指细胞吸收环境中的营养物质（也称为底物），并将其转化成新的细胞成分及生物量的过程。 底物包括碳源、能源、单元、矿物质和维生素 培养基 培养基的组成因细菌、霉菌、放线菌、酵母这些微生物的种类而定，但主要包括以下几种成分：水分、氮源、碳源、无机盐、能源、生长因子。 大肠杆菌LB 培养基的成分：5 g/L 酵母粉， 10 g/L 胰蛋白胨， 5 g/L NaCl 酵母YPD培养基: 1% Yeast Extract（酵母膏） ，2% Peptone（蛋白胨） ，2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉 M9基本培养基: 10g glycerol, 2.5g glucose, 6g Na2HPO4, 0.5g NaCl, 3g KH2PO4, 1 g NH4Cl, 246.5mg MgSO4.7H2O, 14.7mg CaCl2·2H2O and micronutrients including vitamin B1 (2.0 mg), H3BO3 (1.25mg), NaMoO4. 2H2O (0.15mg), CoCl2. 6H2O (0.7 mg), CuSO4 . 5H2O (0.25mg), MnCl2.4H2O (1.6mg), and ZnSO4. 7H2O (0.3mg) per liter. 如有需要，添加相应抗生素 1、水分：主要成分； 2、氮源： （1）无机N:如氨态氮、硝态氮、尿素、氨水、硫氨、硝酸铵； （2）有机N:如氨基酸、蛋白质、蛋白胨、游离N（即气态氮）。 3、碳源：一般微生物如细菌中的异养型主要碳源是含碳的有机化合物，碳氢化合物等。 4、无机盐：如NaCl KH2PO4 等 　　微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。 有些细菌除上述成分外还需要添加 “生长因子”，他们通常是维生素类（如B族维生素）某些氨基酸或核酸等。 5、pH 霉菌、酵母偏酸pH4.5---5.5,配制时须把pH值调高些。 细菌、放线菌中性或碱性（自然即可）。微生物在生长中有可耐受的pH值范围，琼脂在pH5以下有酸解现象，如不调pH固体培养基不凝固。 培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。 　培养基分类一（成分）： （1）天然培养基：马铃薯、玉米粉、豆饼粉、　　　 　　　　　　　　 豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨 （2）合成培养基：如查氏培养基用于营养代谢、 　　　　　　　　 分类鉴定、选育； （3）半合成培养基：天然有机物加化学药品如 PDA培养基。 培养基分类二（状态）： （1）固体培养基； （2）半固体培养基； （3）液体培养基。 ＊依据凝固剂的多少，是否添加而定。 ＊添加凝固剂（琼脂、明胶、硅胶 （自养微生物）） (1)基础培养基：细菌的普通培养基（牛肉膏蛋白胨） (2)营养培养基（加富）：苛求特殊营养，加血清、血液、组织液、酵母高生长因子 (3)鉴别培养基：某代谢产物需特定化合物或试剂。（某种微生物在这种培养基上培养后某代谢产物与这种特定的化合物或试剂能发生某种明显的特征。因此可以区别不同微生物） (4)选择培养基：抑制不需要的，利于所需微生物生长如马丁培养基选择真菌。 培养基分类三（用途）： 二、消毒与灭菌： 消毒（disinfection）：消灭病原菌和有害微生物的营养体。 灭菌（sterilization）：杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。 1、灭菌可分为： （1）干热灭菌：A)火焰烧灼如接种工具、试管口、瓶口；　　 　B)利用电烤箱（160℃—170℃）玻璃器皿 2小时 ； （2）湿热灭菌：A)高压蒸汽—0.1MPa、121℃、15—30min 残留冷空气排除—空气膨压水蒸气膨压，同一压力下含空气的水蒸汽温度低于蒸汽温度。 （3）超高温杀菌（ultra high temperature sterilization,UHTS）:135℃—150℃ 几秒钟对牛乳、果汁、液态食品进行处理的一种工艺，即能杀死产品中的微生物又能保护产品的品质和营养价值。 过滤除菌： 如血清、抗生素、糖类溶