第3章可移动的遗传因子和染色体外遗传因子概念.ppt

第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 分子A上的空隙由DNA聚合酶补上，B分子中被取代的链降解。然后分子A中新合成的与B分子中被降解掉的单链末端之间连接也形成Holliday中间体（连接体），然后也进行异构化并拆分，进行重组。 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 有一些例子说明这个模型的正确性。 Meselson Radding 单链入侵模型* 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 双链断裂模型 1983年利用高灵敏技术在酵母中所做的实验发现，酵母中的同源重组的发动是由一条DNA分子双链断裂而引起的。 后来在细菌和噬菌体和低等真核生物中也发现这种双链断裂开始的同源重组。更多的试验表明，同源重组的启动是由于双链断裂，而不是单链断裂。 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 Szostak, J. W., Orr-Weaver, T. L., Rothstein, R. J., and Stahl, F. W. (1983). The double-strand-break repair model for recombination. Cell 33, 25-35. 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 双链断裂模型认为，重组发生于一个DNA分子的两条链均被切断，细胞中的一种II型DNA拓扑异构酶将被切断的DNA分子连接起来确保不会彼此完全脱离。 每一端中有一条链被核酸外切酶修剪，结果末端形成有大约500bp左右的3’端突出结构。 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 其中的一个以单链入侵的方式侵入同源的DNA分子，寻找同源的序列。 断裂的链被DNA聚合酶延长，结果也会形成Holliday 连接体，沿着异源双链区域移动。 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 这里，被剪切的DNA延伸时是以未被切除的DNA一方的对应区域为模板的。同样，这里的Holliday连接体也会以某种方式被解开，从而产生重组。 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 双链断裂模型 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 SpoII 是一种拓扑异构酶，双链断裂后，它将双链连接起来，防止分开。 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 双链断裂模型虽然令人吃惊，但目前已经得到实验数据的支持，在酵母体内已经发现了类似与大肠杆菌重组时的各种蛋白的同源蛋白。目前认为，生物体内的一般性重组都是由双链断裂发动的，减数分裂也是由双链断启动的。 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 但是也有的遗传学家认为在高等的动物体内，DNA双螺旋反复经常性的断裂不大可能的。 同源重组的双链断裂模型* 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 进行同源重组至少要有多长的同源序列呢？ 实验证明如果同源顺序短于75bp，则重组频率大降低。这个长度要比两条互补的单链形成双链所需的长度（约10bp）要长得多。? 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 同源重组中所需要的酶的种类和功能 目前发现大肠杆菌中有几个不同的重组系统，分别称为RecBCD，RecE和RecF途径。 其中最重要的是RecBCD途径，当这个系统不能工作时由RecE系统代替，而当RecE途径不能发挥作用时就由RecF途径取代。他们的功能有部分重叠。 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 参与同源重组的酶有很多，如RecA、RecB、RecC、RecD、RecF、RecO、RecR、RuvA、RuvB、 RuvC等等。 其中最重要的是RecA，参与各种途径的重组系统。 首先在大肠杆菌中发现这些酶，随后在其他 的不同生物中均发现了这些酶的同源基因。 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 RecA有两个主要的功能（1）诱发SOS反应；（2）促进DNA单链与同源双链分子发生链的交换，从而使重组过程中DNA配对、Holliday中间体的形成，分支移动等步骤得以产生。 当RecA与DNA单链结合时，数千RecA单体协同聚集在单链上，形成螺旋状纤丝。RecF、RecO和RecR蛋白调节RecA纤丝的装配和拆卸。 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 RecA蛋白分子质量为38 000，它与单链DNA结合形成螺旋纤丝。此复合物可以与双链DNA作用，部分解旋以便阅读碱基序列，迅速寻找与单链互补的序列。 互补序列一旦被找到，单链与双链中的互补链配对，同源链被置换出来。链的交换速度大约为6bp／s，交换沿单链5-3方向进行，直至交换终止，在此过程中由RecA水解ATP提供反应所需能量。 第3章 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 RecA 蛋白的功能 第3章 可移动的遗传因子和染