生物选修3动物细胞培养和核移植技术要点.ppt

二.动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物） 分 类 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 (一)、 动物细胞核移植概念： (二)、体细胞核移植的过程： 请看教材P48图2-21 思考： 1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用此细胞作为受体细胞有什么好处？ 2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？ MⅡ中期卵母细胞 诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成 细胞分裂和发育进程。 卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富，提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞核体现全能性的物质。 电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎 卵母细胞采集、培养 MⅡ期卵母细胞 供体牛 供体细胞注入去核卵母细胞 代孕母牛 克隆牛 体细胞培养 去核卵母细胞 去核 胚胎 移植 体细胞核移植过程（体细胞克隆动物） 整个过程用了哪些技术？ 细胞培养、核移植、胚胎移植 新生牛的性别、基因？ 与供体相同 繁殖方式？ 无性繁殖 原理？ 动物细胞核的全能性 (二)、体细胞核移植的过程： 母绵羊A 乳腺细胞（体细胞） 母绵羊B 未受精的卵细胞 母绵羊C “多莉” 新的卵细胞发育成早期胚胎 去核卵细胞 提取细胞核 核移植 胚胎移植 体细胞核移植技术 克隆羊 步骤一：从一只6岁芬兰多塞特白面母绵羊（姑且称为A）的乳腺中取出乳腺细胞，将其放入低浓度的营养培养液中，细胞逐渐停止分裂，此细胞称之为“供体细胞”； 步骤二：从一头苏格兰黑面母绵羊（B）的卵巢中取出未受精的卵细胞，并立即将细胞核除去，留下一个无核的卵细胞，此细胞称之为“受体细胞” 步骤三：利用电脉冲方法，使供体细胞和受体细胞融合，最后形成“融合细胞”。电脉冲可以产生类似于自然受精过程中的一系列反应，使融合细胞也能像受精卵一样进行细胞分裂、分化，从而形成“胚胎细胞”； 步骤四：将胚胎细胞转移到另一只苏格兰黑面母绵羊（C）的子宫内，胚胎细胞进一步分化和发育，最后形成小绵羊--多莉。 换言之，多莉有3个母亲：基因母亲，提供基因组；线粒体母亲，提供去核卵细胞；代孕母亲，将多莉生下来。有意思的是虽然有三个母亲但多莉没有父亲。 P49讨论： 1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部 来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在 供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将 受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏(P49小资料）。 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左 右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞 遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞 一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细 胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基 础，通常采用传代10代以内的细胞。 2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？ 3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有 少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵 母细胞。 此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的 一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系， 核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境 不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和 核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物 不会是核供体动物100%的复制。 (三)、体细胞核移植技术的应用前景： 1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程 2、保护濒危物种 3、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植 4、了解胚胎发育和 衰老过程；追踪研 究疾病的发展过程 和治疗疾病 让学生思考如下问题： 1、从个体发育的角度看，选取什么样的组织作为培养对象？ 2、怎样将动物活体组织分散成单个细胞？可以用胃蛋白酶处理吗？为什么？蛋白酶处理组织会不会破坏细胞的结构？ 3、培养基是用液体的还是固体的？培养基中应加入哪些营养物质？ 4、培养动物细胞时放在什么样的温度下，对培养液的PH值有什么要求？培养瓶中的气体由要求吗？ 5、怎样防止培养液当中混入细胞菌或病毒？ 6、动物细胞能无限增殖下去吗？——一般10代以内可以保持正常核型不断增殖，从10代到50代细胞增殖会逐渐减慢直至完全停止。少数细胞由于传代过程中细胞核型发生改变突破了接触抑制可无限增殖下去成为不死性的细胞。 1、卵母细胞从哪来？——屠宰场废弃的卵巢中采集到卵母细胞，体外培养到减数二次分裂中期。 2、如何去除细胞核？——用微型吸