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白藜芦醇对TRAIL诱导的乳腺癌细胞凋亡和侵袭能力的影响及机制研究 前言及立题依据 乳腺癌是危害我国妇女健康最主要的恶性肿瘤之一。在许多发达地区，发病率已经上升至女性恶性肿瘤第一位。国外报道2000年全世界恶性肿瘤新发病例数为 1006万人，其中10%的病例为乳腺癌，每年死亡病例数约为37万。主要治疗方法包括手术、化疗、放疗、内分泌治疗等，但各有局限性，特别是放、化疗对正常细胞具有毒性作用。近年来，生物制剂如单克隆抗体与化疗药物的联合在胃癌，结肠癌和肺癌的治疗中取得显著的疗效。 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 TRAIL（TNF related apoptosis inducing ligand）是TNF超家族的成员之一，可与死亡受体结合诱导细胞凋亡。于1995年由Wiley小组首先克隆并命名。肿瘤坏死因子家族主要有三个成员，分别是Fas、TNF及TRAIL。由于TNF可启动严重的炎症反应,Fas会引起重度的肝损伤，而TRAIL显著特点是选择性地诱导肿瘤细胞凋亡,不伤及正常细胞，更为重要的是，TRAIL诱导的炎症反应比其它TNF成员轻。近年来研究发现 TRAIL 可以选择性杀伤肿瘤细胞和转化细胞，而对正常细胞无影响，而且 TRAIL 诱导肿瘤细胞的凋亡不依赖 p53 基因, 对 p53 变异或缺失的肿瘤细胞亦有较强的杀伤作用。因此它在肿瘤凋亡疗法方面的研究日益受到重视。 虽然TRAIL对大多数肿瘤有很好的活性，但研究也发现一些肿瘤细胞对TRAIL诱导的凋亡存在天然或获得性耐药。研究还发现，TRAIL 的耐药机制是多层次的，存在肿瘤细胞的个体差异性，早期认为细胞对 TRAIL 敏感还是耐受，与细胞表面 TRAIL 受体的表达和分布有关。但随着研究的深入发现，凋亡通路胞内水平的调节比受体水平的调节可能起着更为重要的作用。研究发现TRAIL与受体结合可激活NF-kB(nuclear factor kappa-B)，继而启动抗凋亡基因的转录，阻止细胞发生凋亡。细胞核因子NF-kB不仅介导调控炎症反应，在细胞增殖、死亡、分化和免疫调节等不同细胞生理过程中均起重要作用。正常情况下，NF-kB在细胞质内与其抑制因子IkBa结合，处于无活性状态。许多细胞外信号刺激引起细胞内一系列级联反应，导致NF-kB的释放、积累而活化。活化后NF-kB进入细胞核执行转录因子功能。调控其下游一系列靶基因表达，如:c-myc、cyclin Dl、survivin、bcl-2、bax等，这些基因表达的相应蛋白因子与细胞增殖、存活和恶性肿瘤的发生密切相关。因此抑制NF-kB活性可能增加一些肿瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性。 白藜芦醇(Resveratrol，RES)是一种广泛存在于葡萄、虎杖、花生等植物性食物或药物中的多酚类活性单体, RES 具有一定的强抗氧化性、抗炎、保护神经、抑制血小板聚集、改变类花生酸合成、调整油脂及脂蛋白代谢、凋亡诱导作用等功效。它可通过活化caspase，释放细胞色素C来诱导细胞凋亡，并可通过抑制DNA聚合酶活性，将细胞周期阻滞于S和G2期。有研究报道，RES能下调骨髓瘤细胞内NF-kB及其调节的下游预凋亡基因产物和生长因子的蛋白水平，还可以通过阻止IkBa磷酸化、降解，进而抑制NF-kB的核转移及其与DNA的结合来抑制NF-kB的活性。RES在细胞内的作用靶点相当广泛，包括NF-kB及其下游靶基因产物:Survivin、Bax、Bcl-2、Bcl-xL、 cyclin Dl、MMP-2 、MMP-9。其中MMP-2 、MMP-9属于基质金属蛋白酶(MMPs),它涉及人体多种生理及病理过程，如炎症、胚胎发生、血管形成、肿瘤侵袭转移等。MMP-2能够分解基底膜的主要成分-血浆纤维连接蛋白和层粘蛋白;MMP-9能够分解基底膜中的巢蛋白。大量研究表明，MMP-2、MMP-9在泌尿系统，胃肠道、乳腺、肝脏等恶性肿瘤中均有高表达，且和肿瘤的侵袭、分级、分期密切相关。 近些年国外有人发现了白藜芦醇这种肿瘤化学预防剂的报道，但关于白藜芦醇增强TRAIL 诱导乳腺癌细胞凋亡及其增敏机制的研究尚未见报道。 鉴于上述: RES能下调调节NF-kB和上调NF-kB抑制因子IkBa蛋白水平,同时还影响下游靶蛋白水平。我们推测在乳腺癌细胞中，NF-kB通路可能参与了对TRAIL的耐药。如果白藜芦醇与TRAIL联用于乳腺癌细胞, 白藜芦醇可能通过对NF-kB及其下游靶基因产物的影响而增强TRAIL对乳腺癌细胞的敏感性,同时降低乳腺癌细胞的侵袭能力。 因此，本研究以乳腺癌细胞系为模型,探讨在RES诱导乳腺癌细胞凋亡过程中线粒体途径和对凋亡调节蛋白的作用;以及NF-kB通路在TRAIL诱导凋亡中的作用; 观察其对乳腺癌细胞侵袭转移的影响及机制。 研究目标: