第八章微生物遗传变异与育种技巧.ppt

实验2 细菌培养实验 培养基培养 实验3 S型菌的无细胞抽提液试验 结论： 以上实验说明，加热杀死的S型细菌，在其细胞内可能存在一种具有遗传转化能力的物质，它能通过某种方式进入R型细胞，并使R型细菌获得表达S型荚膜性状的遗传特性。 结论 以上结果表明，只有S型菌的DNA才能够将肺炎链球菌的R型转化为S型；而且DNA纯度越高，其转化效率也越高，直至6X10-8g的纯DNA时，仍能够保持转化活力。 有利地说明， S型菌转移给R型的绝不是遗传性状（在这里荚膜多糖）的本身，而是以DNA为物质基础的遗传信息。 结论 以上两组实验可清楚看到：在噬菌体感染过程中，其蛋白质根本没进入宿主细胞。进入的只是DNA，但却有自身的增值、装配能力，最终会产生大量既有DNA核心、又有蛋白质外壳的完整子代噬菌体颗粒。 这有利地证明，在其DNA中，存在着包括合成蛋白质外壳在内的整套遗传信息。 高度重复序列：在基因组中重复频率高，可达百万以上，因此复性速度很快。在基因组中所占比例随种属而异，约占10-60％，在人基因组中约占20％。 高度重复顺序的功能a.参与复制水平的调节:常存在于DNA复制起点区， 或是一些蛋白质（包括酶）和DNA的结合位点； b.参与基因表达的调控：可以转录到核内不均一 RNA分子中，而有些反向重复顺序可以形成发夹 结构，这对稳定RNA分子，免遭分解有重要作用；c.参与转位作用：几乎所有转位因子的末端都包括 反向重复顺序。 d.与进化有关：不同种属的高度重复序列的核苷酸序列不同，具有种属特异性； e.同一种属中不同个体的高度重复序列的重复次数不一样，这可以作为每一个体的特征，即DNA指纹。 f.α卫星DNA成簇的分布在染色体着丝粒附近，可能与染色体减数分裂时染色体配对有关，即同源染色体之间的联会可能依赖于具有染色体专一性的特定卫星DNA顺序。 中度重复序列：大致指在真核基因组中重复数十至数万（105）次的重复序列。其复性速度快于单拷贝顺序，但慢于高度重复顺序。少数在基因组中成串排列在一个区域，大多数与单拷贝基因间隔排列。 功能：与组蛋白的合成有关，DNA复制时，组蛋白也要成倍增加，而且往往在DNA合成一小段后，组蛋白马上就要与其相结合，这要求在较短的时间内合成大量的组蛋白，因而需要有大量的组蛋白基因存在。 单拷贝序列：在单倍体基因组中只出现一次或数次，因而复性速度很慢。单拷贝序列在基因组中占50-80％，如人基因组中，大约有60-65％的序列属于这一类。 功能：单拷贝序列中储存了巨大的遗传信息，编码各种不同功能的蛋白质。目前尚不清楚单拷贝基因的确切数字，但是在单拷贝序列中只有一小部份用来编码各种蛋白质，其他部份的功能尚不清楚。 顺反子（cistron）：即结构基因，为决定一条多肽链合成的功能单位，约1000bp。 1955年，美国分子生物学家本泽（Benzer）通过对大肠杆菌的噬菌体T4的rII区基因的深入研究，揭示了基因内部的精细结构。提出了基因的顺反子概念。 在原核细胞中，通常是几种不同的mRNA连在一起，相互之间由一段短的不编码蛋白质的间隔序列所隔开，这种mRNA叫做多顺反子mRNA。这样的一条mRNA链含有指导合成几种蛋白质的信息，称为多顺反子。 单顺反子（monocistron）：真核基因转录产物为单顺反子，即一种基因编码一种多肽链或RNA链，每个基因转录有各自的调节元件。 质粒载体pBR322是研究得最多，使用最早且应用最广泛的大肠杆菌质粒载体之一。符号质粒载体pBR322中的“p代表质粒；“BR”代表两位两位研究者Bolivar和Rogigerus姓氏的字首，“322”是实验编号。 pBR322是一个人工构建的重要质粒，有万能质粒之称。它是由pSF2124、pMB8及pSC101三个亲本质粒经复杂的重组过程构建而成的。 第一个优点：大小为4361bp，相对分子质量较小； 第二个优点：它带有一个复制起始位点，保证了该质粒只在 大肠杆菌的细胞中行使复制的功能。 第三个优点：具两种抗生素抗性基因—氨苄青霉素抗性基因 和四环素抗性基因，供转化子的选择标记。 第四个优点：具有较高的拷贝数，经过氯霉素扩增以后，每 个细胞中可累积1000-3000份拷贝，该特性为重 组体DNA的制备提供了极大的方便。 由于其为人工构建质粒，虽然带有抗药性基因，但已不能在自然界的宿主细胞间转移，同时应用安全菌株，亦不会引起抗生素抗性基因传播。 转座因子广泛存在于真核与原核细胞中，由美国遗传学家Barbara MeClintock首先在玉米中发现的，借此或1983年诺贝尔奖。 原核微生物中的