DNA提取药剂配制.data..docVIP

1M Tris –HCl pH 8.0 1L 1．在1L烧杯中称取 121g Tris base ，溶于800ml DDW中。 2．放入pH meter 探头，用con.HCl调pH值至8.0。 3．从烧杯移至量筒中，DDW定容至1000ml，移入试剂瓶中。 4．121℃灭菌15min。 注意：大约需要con.HCl 42ml。PH接近8.0时，小心滴入con.HCl，防止过量。Tris buffer 的pH值随温度变化，应在室温调制。应用范围在7.2－9.0。 0.5M EDTA pH 8.0 500ml 1．在500ml烧杯中称取 93.06g Na2EDTA?H2O ，加350-360ml DDW，Na2EDTA?H2O难溶。 2．加10g左右的NaOH颗粒，放在搅拌器上搅拌。 3．大约20min后溶液澄清，放入pH meter 探头，pH大约7.5左右，然后加10M NaOH，大约5ml左右，pH至8.0。 4．从烧杯移至量筒中，DDW定容至500ml，移入试剂瓶中。 5．121℃灭菌15min。 Extraction Buffer（for benzyle chloride）pH 9.0 100mM Tris –HCl 40 mM EDTA 200ml 的配法： 1．在300ml烧杯中称取 2.4228g Tris base ，溶于170ml DDW中。 2．加入16 ml 0.5M EDTA （pH 8.0）。 3．放入pH meter 探头，此时pH大约9.3左右，用大约0.5ml的con.HCl调pH值至9.0。 4．从烧杯移至量筒中，DDW定容至200ml，移入试剂瓶中。 5．121℃灭菌15min。 300ml 的配法： 1．在300ml烧杯中称取 3.6342g Tris base ，溶于255ml DDW中。 2．加入24 ml 0.5M EDTA （pH 8.0）。 3．放入pH meter 探头，用con.HCl调pH值至9.0。 4．从烧杯移至量筒中，DDW定容至300ml，移入试剂瓶中。 5．121℃灭菌15min。 20％ SDS 160ml 1．置备SDW：将200ml的DDW灭菌，121℃灭菌15min。 2．在300ml烧杯中称取 32g SDS，注意不要吸入。加100ml SDW，放在搅拌器上搅拌，加热40-50℃溶解。 3．溶液澄清后，从烧杯移至量筒中，SDW定容至160ml，移入试剂瓶中。 2倍稀释后就是10％ SDS。 3M KOAC pH 5.0 100ml 简便配法（不用测pH，经验来） 1．在100ml烧杯中称取 20.7g KOAC ，注意烧杯底部先加入少量DDW，防止粉尘。 2．加入5.13ml的冰醋酸，搅拌。 3．从烧杯移至量筒中，DDW定容至100ml，移入试剂瓶中。 4．121℃灭菌15min。 300ml简便配法（不用测pH，经验来） 1．在300ml烧杯中称取 62.1g KOAC ，注意烧杯底部先加入少量DDW，防止粉尘。 2．加入15.39ml的冰醋酸，搅拌。 3．从烧杯移至量筒中，DDW定容至300ml，移入试剂瓶中。 4．121℃灭菌15min。 Tris Saturated Phenol 100ml 1．在300ml的烧杯中称取100g Crystal phenol，将phenol在70℃恒温水浴中融化。 2．加入1/1000（0.1g）的8-quinolinol，防止氧化，使phenol可保存2－3个月。phenol溶于他后发黄。 3．加100ml 等量的0.5M Tris –HCl （pH 8.0），振荡（1S 1－2次）1min。静置。去除上层液。 4．再加100ml 等量的0.1M Tris –HCl （pH 8.0），振荡（1S 1－2次）10min。静置。去除上层液。 5. 加1/10 10ml 倍的0.1M Tris –HCl （pH 8.0）。 5．外包锡箔纸或移入褐色瓶中，4℃冷藏，1个月期限。 CIAA（Chloroform：Isoamylalcohol）24：1 50ml 1．取Chloroform 48ml入试剂瓶中，加2ml的Isoamylalcohol。 2．轻轻倒入混合。 3．Chloroform易挥发，要置备小剂量，经常配制。 4．4℃冷藏。 TE Buffer 100ml 10mM Tris－HCl pH 8.0 1mM EDTA pH 8.0 在100ml量筒中加1M Tris –HCl （ pH 8.0） 1ml。 加0.5 M EDTA （ pH 8.0）0.2ml。