环氧合酶-2在子宫内膜癌组织中的表达和临床意义.pdfVIP

学院妇科刮宫或手术切除的新鲜组织标本52例，分为3组：(1) 子宫内膜癌组32例；(2)不典型增生子宫内膜组10例；(3)正常 子宫内膜组10例。所有病例均为初治病例，平均年龄53．7岁。 部分标本经福尔马林固定，进行常规HE染色，请二位病理专家阅 片，按国际妇产联盟(FIGO)1988年修订的标准确定病理学诊断、 组织学类型和组织学分级。其余标本置液氮中冷冻，然后送于一 70℃冰箱中保存。子宫内膜癌组均有完整的临床病理资料，其中 内膜样腺癌22例，腺角化癌7例，透明细胞癌3例；手术一病理分 期I期18例，Ⅱ期9例，Ⅲ期5例；组织学分级G，级14例，G：级 10例，G，级8例；伴深肌层浸润12例；伴淋巴结转移5例；腹腔液 细胞学检查阳性4例。 2．主要试剂 COX一2及内参照引物均由北京奥科生物有限责任公司合 成；提取总RNA的TRIzol试剂由美国Promega公司提供；逆转录 和PCR扩增所需的酶及其它试剂由日本TaKaRa公司提供；电泳 用琼脂糖由沈阳联星生物公司提供。 3．方法 (1)总RNA提取：采用TRIzol一步抽提法。RNA纯度采用紫 外透射仪测定OD值，O!)260／280值为1．6—2．0。 (2)逆转录合成eDNA：在10“反应体系中分别加入样本 RNA 1山以90℃孵育3min，42℃30min合成eDNA。 (3)PCR扩增和产物分析：在PCR反应体系中将eDNA产物 及引物在95。C90s预变性，94℃90s变性，55℃45s退火，72℃90s 复性，进行35个循环后，72℃10rain延伸。另一反应体系中同时 扩增B—actin作为内对照。将PER扩增产物用2％琼脂糖凝胶电 泳检测，溴乙锭染色分析，紫外灯下拍照，电泳凝胶成像及自动分 析系统摄像、并检测各扩增带的产物含量。中X174一nine lI DNA Marker为分子量标准。每次实验均设阳性及空白对照。 ·2· 4．结果判断：EB显色后，与Marker相比较有305bp条带及内 对照690bp条带显示者判断为阳性，仅有内对照690bp条带显示 者判断为阴性。用内对照吸光度值标化COX一2吸光度值，得到 COX一2的相对含量，具体计算公式如下：COX一2相对含量= (COX一2密度／13一actin密度)X 100。 5．统计学处理：采用SPSS软件进行统计学处理。表达率采 用Fisher’s精确概率法和X2检验；相对含量采用方差分析和t检 验。 结 果 1．COX一2mRNA在子宫内膜癌、不典型增生子宫内膜及正常 子宫内膜组织中的表达：三种组织中都有COX～2 mRNA的表达， 在子宫内膜癌和不典型增生子宫内膜组织中，COX一2 mRNA表 达率高于正常子宫内膜组织，经Fisher’s精确概率法检验，有显著 性差异(P0．05)，而两者问表达率比较，差异元显著性(P0． 05)；COX一2 mRNA在三种组织中的相对含量经方差分析，差异 非常显著(P0．01)，两两比较经Q检验，亦有显著性差异(P0． 叭)。 2．COX一2mRNA异常表达与子宫内膜癌临床病理特征的关 系：COX一2mRNA的表达率在不同的病理类型、手术一病理分期、 组织学分级、肌层浸润、腹腔液细胞学检查及淋巴结转移的子宫内 膜癌组织中比较均无显著性差异；COX一2raRNA的相对含量在 深肌层浸润及中、低分化子宫内膜癌组织中，明显高于浅肌层浸润 及高分化子宫内膜癌组织，有非常显著性差异(P0．01)，而在其 他不同临床病理特征的子宫内膜癌组织中，其相对含量比较均无 显著性差异。 ·3· 讨 论 1．COX一2基因的结构、功能及致癌机制 人COX一2基因长约8．3 kb，含有10个外显子，9个内含子， 位于1号染色体q25．2～25．3，与COX一1相比，仅在外显子2上 缺如，其余外显子均是保守的。阿斯匹林(一种NSAIDs)能将 COX一2的516位点上的丝氨酸乙酰化，导致COX一2活性的降 低。COX～2可通过改变细胞周期、抑制凋亡、增加侵袭、促进血 管生成、产生免疫抑制及促进癌前病变向癌的转化等几种不同的 机制来发挥致癌作用。 2．COX一2表达与子宫内膜癌发生、发展的关系及其临床意 义 不典型增生子宫内膜是子宫内膜癌的癌前病变。本研究发 现，COX一2 mRNA的表达率及相对含量由正常子宫内膜到不典 型增生子宫内膜及到子宫内膜癌呈逐渐增加趋势，在子宫内膜癌 及不典型增生子宫内膜中的表达明显高于正常子宫内膜，差异非 常显著。COX一2在癌前病变中的表达增高，提示可能与子宫内 膜癌发生的早期阶段密切相关。 本研究还观察了COX一2 mRNA表达与子宫内膜癌临床病理 特征的关系，发现在中、低分化子宫内膜癌中COX一2 mRNA相对 含量明显升高，与高分化子宫内膜癌相比，差