人类染色体标本制备经验.docVIP

第一部分 人类染色体研究的实验室建设 ?一、实验室要求 1、准备室（约30平方米）：供清洗玻璃仪器、配制试剂仪器包装消毒及制片场所，还必需配置耐酸碱水池、实验操作台、药橱等设施。并能合理放置冰箱、电热干燥箱、离心机、纯水器、消毒锅、天平等仪器，以方便使用。 2、无菌室（约25平方米）：用作细胞的接种培养、配备培养基。分为更衣室（约4平方米）、缓冲室（约6平方米）、接种室（约15平方米）。配备空调机、传递窗、离心机、倒置显微镜、超净工作台、臭氧发生器或紫外灯、培养箱等设备仪器。 3、分析室（约15平方米）：为观察分析核型、整理资料场所。配备高清晰度带照相装置的显微镜，电脑、打印机、办公桌等。 ?二、设备仪器 （一）仪器 1、超净工作台一台 2、光学显微镜二台（可以安装染色体软件分析系统） 倒置显微镜与带照相装置的正立显微镜各一台。倒置显微镜用作细胞培养；正立显微镜用作核型分析，有条件的单位可配备染色体分析软件、电脑、打印机等。 3、隔水式恒温培养箱一台 开展产前检查的单位，最好购买二氧化碳培养箱。 4、电热干燥箱一台 5、冰箱二台：普通冰箱和低温冰箱各一台 6、酸度计一台（可略） 7、纯水器（电阻率18兆欧姆）一台；（可略） 8、高压灭菌锅一台（可略） 9、电热磁力搅拌器一台（可略） 10、真空泵（无油）一台（可略） 11、电子天平二台（万分之一天平与普通天平各一台） 12、水平式离心机二台 转速0-4000转/分，10毫升/管，大容量与小容量各一台。大容量的供制片用，小容量的放置无菌室供细胞培养用。 13、可调移液器若干支：规格从5-5000微升若干支 14、超声波清洗器一台（可略） 15、水浴箱（0-100可调） （二）玻璃器皿与耗材 1、培养瓶：15毫升链霉素瓶，25毫升小方瓶（建议采用一次性培养瓶）。 2、刻度离心管（10毫升）50支 3、量筒（10-1000毫升）：各种规格各一个。 4、不锈钢滤器（各种规格各一个）及滤膜（孔径中0.25微米）一盒 5、注射器（1-20毫升）若干 6、盐水瓶（100-500毫升）若干 7、试剂瓶（磨口）10个 8、蒸馏水瓶（3万或5万毫升）2个 9、染色缸1个 10、研钵1个 11、酒精灯2盏 12、滴管（带吸头）50支 13、载玻片若干 14、试管架和离心管架各2个 15、各种镊子与剪刀若干 16、铝饭盒（供盛培养瓶滴管等器械消毒时使用） 17、烧杯（容量50-2000毫升）各一个 18、抽滤瓶（1000-2000毫升）一个 19、各种规格的可调移液器吸头若干 20、载波片盒（50-100片）若干 * 玻璃器材的材质应采用中性硬质玻璃或硼硅玻璃 三、常用药品及试剂 1、培养基（RPMI 1640、HamF10） 2、植物凝集素（phytohemagglutinin简称PHA） 3、肝素钠（抗凝剂，医用级） 4、血清（小牛血清、胎牛血清） 5、抗菌素（青霉素、链霉素）医用级 6、秋水仙素（秋水仙碱） 7、氧化钾（分析纯） 8、碳酸氢钠（分析纯） 9、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠（分析纯） 10、乙二胺四乙酸二钠（EDTA，分析纯） 11、三羧甲基氨基甲烷（Tris，分析纯） 12、胰蛋白酶 13、酚红 14、姬姆沙染料（Giemsa） 15、甲醇（分析纯） 16、冰醋酸（冰乙酸）（分析纯） 17、重酪酸钾（化学纯） 18、浓硫酸（工业级） 19、香柏油 20、甘油（分析纯） 21、乙醇（无水和纯度95%，化学纯） 22、乙醚（无水，化学纯） 23、生长因子（碱性成纤维细胞因子bFGF、表皮细胞生长因子EGF） 24、氢氧化钠（分析纯） 25、柠檬酸钠（分析纯） （注：达晖生物全套提供上述仪器和试剂产品，并提供完善的技术支持和服务） ?第二部各类器械清洗与常用试剂配置 ?一、各类器械清洗处理 1、清洗液配置 清洗液配方 配方试剂 1 2 3 4 5 重鉻酸钾（克） 60 60 80 100 200 工业硫酸（毫升） 90 460 100 800 500 水 （毫升） 750 300 1000 200 500 方法：先将重酪酸钾溶于水中，再慢慢加入工业浓硫酸。 注意：配制时会产生高热，应采用耐高温材料配制。配制人员要做好防护措施（如配带保护眼镜、耐酸手套等）贮存清洗液的容器一定要带盖子，防止清洗液不断吸收空气的水分，而变质失效。容器的材质可选用陶瓷或耐酸硬塑。 * 配制时切记不能将水倒入硫酸里！配方3较为广泛使用。 2、玻璃器皿清洗 新的玻璃器皿先用清水冲干净，再在清洁剂（如洗衣粉、洗洁精等）溶液中，用毛刷彻底刷干净，然后清水冲净。晾干（如有超声波清洗器，可将器皿用清水冲净后放入超声波清洗器中清洗后，清水冲净晾干）。再用5-10%HCL（浓HCL原液浓度约36%）泡过夜后，冲净烘干，再泡入