第五章 减压柱色谱分离技术研讨.pptVIP

?第五章 减压柱色谱 分离技术 为加快柱分离的速度和/或增加分离度，通常采用在柱前加压和柱后减压的方法进行柱层析与分离。 —柱前加压法通常称为加压柱色谱 —柱后减压法通常称为减压柱色谱 第一节 真空液相色谱技术 Vacuum Liquid Chromatography 第二节 半干柱液相色谱 Semi-Dry Column Chromatography SDC 第一节 真空液相色谱技术Vacuum Liquid Chromatography 真空液相色谱法，简称VLC，也称减压液相色谱法。 是近几年来国外实验室迅速发展起来的新技术，它是利用柱后减压使洗脱剂迅速通过固定相从而很好的分离样品的色谱技术。 VLC具有快速，简易，高效，价廉等优点，目前已成功的应用于有机制备以及天然产物如萜类，类酯，双萜及多种生物样品的分离。 由于经典的柱层析费时费力，需要大量的固定相和洗脱液，工作效率低，为此人们相继建立了离心薄层、 VLC、 FCC等快速层析分离的方法。其中VLC在天然产物分离中应用最多。 该法1969年由澳大利亚Coll J.C提出，1977年首次应用于分离澳洲软珊瑚中2个新的二萜化合物 Cembrenoids . 1979年美国Targett.NM将该法命名为 Vacuum liquid chromatography VLC , 并且详细报道了实验装置和操作方法。 从此以后，VLC便逐渐为广大化学家所接受，并且在实验装置上作了进一步改进。 一、VLC特点 VLC实质上是柱色谱，它综合了制备薄层（Preparative PTLC）和真空抽滤技术。 VLC不同于常压柱层析和快速柱层析Fcc，因为后两者洗脱剂是连续的，在操作中不会间断；而VLC进行溶剂洗脱时，在加洗脱剂后，在柱后减压下全部抽出，每一次洗脱收集一次，抽干后，再更换溶剂，并再进行下一个流分的收集，所以在这一点上VLC与PTLC多次展开极为相似。（展开一次后吹干，再展）。 FCC采用柱前加压，而VLC采用柱后加压。 VLC可分离样品量达几十克，而FCC只能分离几克。 VLC吸附剂经处理后可反复使用。 二、实验装置与操作 1986年，Coll和Bowden曾介绍过一种十分简单的用于实验室小规模的减压液相色谱法装置（图－a,b）。 Pelletier在1986年，介绍可使用于较大规模的分离的装置（图－2） 1.固定相； 常采用TLC用硅胶、Al2O3,（粒度：10um～40um 硅胶60H或60G）聚酰胺等 2. 装柱：干法装柱法。 将吸附剂装入漏斗或短柱中，轻轻拍紧或减压拍打或从顶端挤压，直至吸附剂紧密，最后变得坚硬。吸附剂的高度一般不超过5cm。 3，吸附剂用量： （1）对于微量分离，样品＜100mg,可采用直径为0.5～1cm色谱柱或漏斗，吸附剂高度为5cm，一般固定相用量为10～15：1倍，如图4-a,可在小试管中收集流分。 （2）对于0.5～1.0g样品，柱中装有2.5×4cm高度的吸附剂较合适。 （3）对于1～10g样品的分离，可在柱中装入5×5cm的吸附剂。 （4）较大样品分离，最好采用250ml砂芯漏斗中进行。吸附剂的高度为5cm。（如图b）可用三角烧瓶收集之。 加大吸附剂与样品比例，可提高分离度。常用比例为30：1～300：1 三、上样 放掉真空后，常压下加入低极性溶剂于吸附剂表面上，减压使溶剂均匀流过吸附剂。如有空隙，需要重装。使柱子抽干后，重复1～2次，即可准备上样。 A．用低极性溶剂或洗脱剂（如石油醚、正己烷）溶解样品。常压下小心加入柱顶端，再加入洗脱剂或溶剂覆盖吸附剂表面，慢慢减压，使样品在柱顶端形成样品层。 B．可也采用固体上样法。即先将样品溶于极性溶剂，加入5～10份吸附剂，旋转蒸发至干后，加到吸附剂的表面上，然后进行洗脱。 四，VLC流动相选择 与柱层析相同，先用TLC来选择条件。VLC更适用于梯度洗脱，可用二元，三元混合溶剂系统。一般先用极性较小溶剂，如石油醚、正己烷、环己烷，然后逐渐加大极性（CH2Cl2、Et2O、AcOEt、CH3OH） 极性溶剂的增加开始要缓慢（1%，2%，3%等），然后增加的幅度可逐渐增大（5% 10% 20%等），通常收集20～25个流分可将所有成分洗脱。 五、洗脱与收集 用适当溶剂系统洗脱或用梯度洗脱（gradient elution）。 在常压下，加入溶剂后，将柱抽干，收集为一个流分。真空度要求20～70mmHg；抽干后再更换溶剂和容器，重复以上操作，并用TLC跟踪每一个流分的分离情况（先摸一摸再行动）。 为避免每一流分拆卸漏斗，可采用图B的方法，该抽滤甁底部为磨口，减去负压后，更换接受甁。 六、应用实例 1.? VLC 法可用于合成反应混合