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第一章 微生物生长及调节 本章内容 一、生物生长的测定 1. 以数量变化对微生物生长情况进行测定2. 以生物量为指标测定微生物的生长 二、 细菌的群体生长繁殖 1. 生长曲线2. 同步培养3. 连续培养 三、 微生物生长繁殖的调节 1. 调节微生物生长的化学物质2. 调节微生物生长的物理因素 一、生物生长的测定 【一】微生物生长概述 生长：个体体积的增加 繁殖：个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。 细菌太小，往往讨论其群体生长。 在微生物学中提到的“生长”，一般均指群体生长，这一点与研究大生物时有所不同。 细菌个体生长：包括细胞结构的复制和再生、细胞分裂和调节。 （一）染色体复制和分离 双向复制：复制附着点在CM上，随CM生长和细胞分裂而分离，形成两个子细胞。 （二）CW扩增 杆菌中是新合成的肽聚糖在新旧Cw均有分布，而球菌是在赤道板插入，固定位置。 （三）细菌分裂与调节 各种物质复制后，质膜内陷伴随新肽聚糖插入，导致横隔壁向心生长，最后会合，一分为二。调节主要依赖转肽酶和D，D－羧肽酶活性比。转肽酶活性高些，利于CW扩增，导致细菌生长。羧肽酶高些，利于横隔壁形成，导致细胞分裂。 【二】以数量变化对微生物生长情况进行测定 微生物生长的测定： 个体计数： 生物量测定：重量测定、生理指标测定 通常用来测定细菌、酵母菌等单细胞微生物的生长情况或样品中所含微生物个体的数量（细菌、孢子、酵母菌） 1、稀释平板计数法 对样品进行适当稀释→ 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖 → 肉眼可见的菌落 →对菌落数目的计数推测样品中的微生物细胞数 2、涂布平板法 使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！（一般0.2ml） 要求：样品充分混匀；每支移液管及涂布棒只能接触一个稀释度的菌液；同一稀释度三个以上重复,取平均值；每个平板上的菌落数目合适，便于准确计数； 每ml活菌数＝同一稀释度平均数×稀释倍数×5 注意：要三个以上重复平板平均计数；不适合丝状菌 3.显微镜直接计数法 采用细菌计数板或血球计数板，显微镜下直接计数（计算一定容积里样品中微生物的数量）。 显微镜直接计数法缺点： 不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察； （三）以生物量为指标测定微生物的生长 1、比浊法 在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度(optical density, 即O.D.)表示菌量。 注意：测量应在菌浓度与O.D.成正比的线性范围内，否则不准 2、重量法 以干重、湿重直接衡量微生物群体的生物量； 通过样品中蛋白质、核酸含量的测定间接推算微生物群体的生物量； 测定多细胞及丝状真菌生长情况的有效方法 3、 生理指标法 呼吸强度 耗氧量 酶活性 与其群体的规模成正相关 生物热 样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显，因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量热 计等设备来测定相应的指标。 二、群体生长繁殖 （一）生长规律 生长曲线：细菌接种到定量的液体培养基中，定时取样测定细胞数量，以培养时间为横座标，以菌数为纵座标作图，得到的一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线。 包括：迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期 1.迟缓期（lag phase） 细胞分裂之前的准备，适应环境。将少量菌种接入新鲜培养基后，在开始一段时间内菌数不立即增加，或增加很少，生长速度接近于零。也称延迟期、适应期。 延缓期特点： 细胞形态变大或增长，例如巨大芽孢杆菌，在迟缓期末，细胞的平均长度比刚接种时长6倍。一般来说处于迟缓期的细菌细胞体积最大； 细胞内RNA，尤其是rRNA含量增高，合成代谢活跃，核糖体、酶类和ATP的合成加快，易产生诱导酶。 对外界不良条件反应敏感。 减少迟缓期时间措施： （1）遗传学方法改变种的遗传特性（2）用对数生长期的做种子（3）接种前后培养基成分不要相差太大（4）适当扩大接种量 2.对数生长期（log phase） 这时的细菌代谢活性、酶活性稳定且高；大小一致；生活力强；用做种子和实验材料。 3.稳定期（stationary phase） 生长率为0，菌数最多并维持稳定，积累代谢产物的好时期。 对数期到稳定期的转变是细胞重要的分化调节阶段： 1）开始储存糖原等内含物；2）形成芽孢或建立自然感受态（芽孢杆菌）3）发酵过程积累代谢产物的重要阶段；某些放线菌抗生素的大量形成也在此时期 生产上延长稳定期的方法：补充营养物质（补料）或取走代谢