紫外-可见分光光度计试题.pptVIP

第五章 光谱分析仪 紫外-可见分光光度计 原子吸收光谱仪 光谱分析（Spectral Analysis）：指所有对物质发射辐射能的能谱分析或对辐射能与物质相互作用引起的能谱改变的分析。 光谱分析法：基于物质发射的电磁辐射及电磁辐射与物质的相互作用而建立起来的分析方法。 紫外-可见分光光度计：工作波段在200nm～800nm的分光光度计。其中： 200nm～400nm为紫外光区。 400nm～800nm为可见光区。 属于分子吸收光谱仪。 第五节 紫外-可见分光光度计的应用 一、基本分析方法 （一）定性分析 （二）定量分析 （三）纯度鉴定 二、应用实例 （一）可见光谱分析——血清葡萄糖测定 （氧化酶法） （二）紫外光谱分析——血清丙氨酸氨基转 移酶测定（紫外-乳酸脱氢酶法） * * 常用光谱分析仪器 紫外-可见分光光度计 原子吸收分光光度计 红外光谱仪 原子发射光谱仪 荧光分析仪 原子荧光分析仪等 分光光度计：指能够从含有各种波长的混合光中将每一单色光分离出来并测量其强度的仪器。根据其使用光的波长范围不同，分光光度计又可分为紫外分光光度计、可见光分光光度计、红外分光光度计和全波段分光光度计。 现代常用的分光光度计通常将紫外分光光度计和可见光分光光度计合并在一起，称为紫外-可见分光光度计 第二节 紫外-可见分光光度计 的工作原理和基本结构 一、紫外-可见分光光度计的工作原理 每一种物质都有其特定的吸收光谱，因此可根据物质的吸收光谱来分析物质的结构、含量和纯度，这就是吸收光谱分析法的理论基础。 光的吸收定律（朗伯-比尔定律 ）：当用一束单色光照射吸收溶液时，其吸光度与液层厚度b及溶液浓度c的乘积成正比。 一、紫外-可见分光光度计的工作原理 朗伯-比尔定律： I0：入射光强度 b:液层厚度 T:透光度 k:吸光系数 C:溶液浓度 I:透射光强度 A:吸光度 一、紫外-可见分光光度计的工作原理 朗伯-比尔定律适用的条件是： ①入射光为单色光。波长范围越大，单色光纯度越低，对朗伯-比耳定律的偏离就越大。 ②溶液浓度不能过大。在一定浓度范围内的溶液中，邻近分子的存在并不改变每一给定分子的特性，即分子间互不干扰。当溶液浓度很大时，由于溶液分子的相互干扰，该定律不再成立。 二、紫外-可见分光光度计的基本结构 光源 单色器 吸收池 检测器 显示系统 二、紫外-可见分光光度计的基本结构 光源（light source）：提供入射光的装置。 不同类型的分光光度计根据需要配有不 同的光源，但对光源有两个基本要求： 1.在所需波长范围的光谱区域内发射连续光谱； 2.有足够的辐射强度并能长时间稳定。 二、紫外-可见分光光度计的基本结构 几种常用光源比较 光源 波长范围 nm 特 点 钨灯 330~2500 钨丝易蒸发，寿命短。主要用于可见光区 卤钨灯 330~2500 加入卤素使用寿命延长，稳定性好 氢灯 150~400 用于紫外区 氘灯 150~400 发光强度比氢灯高3～5倍 汞灯 254~734 用于紫外或荧光分析仪 二、紫外-可见分光光度计的基本结构 单色器（monochromator）：是将来自光源的 复合光分解为单色光并分离出所需波段光束的 装置，是分光光度计的关键部件。 主要包括： 入射狭缝 色散元件，包括棱镜和光栅 准直镜 出射狭缝组成。 二、紫外-可见分光光度计的基本结构 吸收池（absorption cell）：又称为比色皿、比色杯、样品池或液槽等，是用来盛放被测溶液的器件。同时也决定着透光液层厚度、特定波长光的透光度等多种参数，应具有良好的透光性和较强的耐腐蚀性。可见光范围内：用无色光学玻璃或塑料制作；紫外光范围内：需用能透紫外线的石英玻璃或蓝宝石制作。 二、紫外-可见分光光度计的基本结构 检测器：把光信号转换为电信号的装置称为检 测器，又称为光电转换器。 常用的检测器有： 光电管 光电倍增管 光电二极管阵列 二、紫外-可见分光光度计的基本结构 信号显示系统：是把放大的信号以适当的方式 显示或记录下来的装置。 常用的信号显示装置有： 指针显示 LD数字显示 VGA屏幕显示 计算机显示 第二节 紫外-可见分光光度计的分类 按其光学系统分可分为 单波长分光光度计： 单光束单波长分光光度计 双光束单波长分光光度计 双波长分光光度计 单光束分光光度计特点 ①单光束光路，从光源到试样至接收器只有一个光通道，使用中依次对参考样品和待测试样进行测定； ②只有一个色散元件，工作波长范围较窄； ③通常采用直接接收放大显示的简单电子系统，用电表或数字显示； ④结构简单、附件少、功能范围小，不能做特殊试样测定。 单光束分光光度计结构示意图 光源 单色器 吸收池 检测器 显示系统 双光束分光光度