淋病奈瑟菌的免疫胶体金检测及与传统方法的灵敏度比较研讨.pptxVIP

姓 名 导 师 俞琼，徐建刚，陈静，陈引 蔡挺 淋病奈瑟菌的免疫胶体金检测 及与传统方法的灵敏度比较 1 2 3 立题依据和国内外研究背景 主要研究内容 技术路线 4 5 6 7 可行性分析 创新性与特色分析 进度安排 预期成果 立题依据和国内外研究背景 淋病奈瑟菌为革兰阴性球菌,是淋病的病原体。1879年，奈瑟从35例急性尿道炎、阴道炎及新生儿急性结膜炎病人的分泌物中，分离出淋病双球菌。1885年，Bumm在人、牛或羊的凝固血清培养基上培养淋球菌获得成功，将菌种接种于健康人的尿道内也可产生同样的症状。至此，淋球菌是淋病的病原体的结论始告成立。据 WHO估计,全球每年淋病新发病例超过6000万,发展中国家发病率更呈明显上升的趋势。在我国淋病的感染率居性传播疾病之首。且随着抗生素的广泛使用，淋病奈瑟菌对抗生素的耐药率越来越高，先是青霉素对它失效，再是四环素，环丙沙星，而现在到了头孢克肟。因此，对淋病奈瑟菌进行更深入的研究显得愈发急迫。 淋病依其病期长短在临床上分为急性和慢性。急性淋病临床症状明显，但慢性淋病多无明显临床症状，尤其是女性感染者。约80%感染者早期在临床上不显出任何症状、体征。本次研究的主要目的即为淋病奈瑟菌的检测。 目前的淋病奈瑟菌检测技术 1 2 3 3.1 涂片检查法 培养检查法 免疫学检测法 酶联免疫吸附试验 4 5 6 7 分子生物学检测技术 淋病奈瑟菌基因芯片检测技术 共凝试验快速检测淋病奈瑟菌 泡沫快速试验 3.2 免疫胶体金技术 立题依据和国内外研究背景 当前对于感染有淋病奈瑟菌的女性而言，早期绝大多数是无症状的状态。因此，我们猜测可以研制一种家庭快速检测淋病奈瑟菌的简易装置（类似于验孕棒，验孕棒的原理就是以怀孕女性尿液中升高的人绒毛膜促性腺激素——hcg作为抗原，利用免疫胶体金技术来检测是否怀孕，同理可用尿液中的淋病奈瑟菌的外膜蛋白作为抗原，利用免疫胶体金技术来检测是否感染）。为了确保该简易装置的可行性和提高检出率，本次实验将分离提纯淋病奈瑟菌的主要的外膜蛋白进行免疫胶体金试验，并对处于轻度症状的女性进行淋病奈瑟菌检测以估计免疫胶体金法的检出率。 主要研究内容 通过检测外膜蛋白PⅠ来检测淋病奈瑟菌的存在。 分离提取淋病奈瑟菌的主要外膜蛋白，用免疫胶体金技术检出淋病奈瑟菌上。 与传统的培养法进行灵敏度、检出率和阳性率的比较。 技术路线（前期） 技术路线（前期） 技术路线（体外指标检测） 线性关系 灵敏度 重复性、假阴性率 改变待测淋病奈瑟菌液的浓度，多次实验，计算不同浓度下检出率的变化，观察两种方法线性关系。 尿液环境处理后，分别用免疫胶体金技术（采用多种标记单抗的混合物以提高灵敏度）和传统的培养法检测淋病奈瑟菌。 假阳性率 设计一个浓度梯度检测两种方法检出的最低所需菌群浓度，最低浓度越低，灵敏度越高。 确定一个浓度，在该浓度下进行多次重复检测实验，比较两种方法重复性的好坏和假阴性率。 使用不含菌的培养液对两种方法进行多次检测，比较假阳性率高低。 技术路线（临床指标检测） 采集淋病奈瑟菌女性携带者的尿液和非携带者的尿液 制作简易的层析法免疫胶体金检测试剂，试剂中包含 全部实验所得单抗种类。 将测试剂浸入尿液，检测、统计、计算假阳性率、假 阴性率。 可行性分析 淋球菌培养技术成熟 胶体金特异性、敏感性高 外膜蛋白PⅠ表达于所有淋病奈瑟菌菌株，高度保守，免疫原性强，易于培养和检测。 创新性与特色分析 当前对于感染有淋病奈瑟菌的女性而言，早期约80%感染者早期在临床上不显出任何症状、体征。 涂片检查法对慢性淋病患者敏感性较低，女性患者易出现假阳性。而培养法费时、操作繁琐。 因此，我们提出一个新的猜想，研制一种家庭快速检测淋病奈瑟菌的装置，用分离提纯的淋病奈瑟菌的主要外膜蛋白进行胶体金试验，并用此方法对处于轻度症状的女性进行淋病奈瑟菌检测以估计该方法的检出率，这样就使得淋病奈瑟菌的检测变得安全而简易。 进度安排 1-8周 8-10周 11-24周 25-32周 33-40周 请输入您要的内容请输入您要的内容请输入您要的内容请输入您要的内容请输入您要的内容请输入您要的内容 用TM培养基大量培养淋球菌标准菌株，同时进行实验动物培养。 PⅠ蛋白的分离提取 抗淋球菌单克隆抗体的制备；PⅠ蛋白与IgA1蛋白酶单克隆抗体的分离提纯 免疫胶体金法检测PⅠ蛋白 体外实验和临床实验指标测定，实用性分析 预期成果 分离提取淋病奈瑟菌的主要外膜蛋白PⅠ，通过免疫胶体金法来检测PⅠ，并通过女性早中期患者实验比较免疫胶体金法和传统培养法在检出淋病奈瑟菌上的各项指标差异。 谢谢您的聆听