DNA重组技术在多肽药物中的应用重点分析.pptVIP

DNA重组技术在多肽药物研究中的应用 郑香、陈婷、彭雪润、徐嘉屿 多肽药物 定义： 多肽类药物习惯上常指多肽类激素，指通过化学合成、基因重组或动植物中提取的具有特定治疗作用的多肽。不同种类的多肽药物可广泛作用于内分泌系统、免疫系统、消化系统、心血管系统、血液系统、肌肉骨骼系统等。 特点： 副作用小、疗效好、消耗 低、产出高，发展十分迅速。 多肽药物主要来源 多肽药物主要来源于内源性多肽或其他天然多肽，其结构清楚、作用机制明确，质量控制水平接近于传统的小分子化学药物，而活性上接近于蛋白质药物，集合了传统化学药物和蛋白质药物的优点。 适用于治疗传统化学药物难治的某些复杂疾病，包括代谢性疾病、肿瘤、感染等，多肽药物分子结构小、易改造、易合成，其生产无需大流程装置，普通大型实验室即可达到生产条件，且生产过程中排放的废物少，属于绿色制药，因此多肽药物是21世纪最有发展前途的药物之一。 面临问题与优点 多肽药物研究面临的问题 多肽类药物制剂研究面临的主要问题是多肽的稳定性不好，通过基因工程通过基因工程手段替换引起多肽不稳定的残基或引入能增加多肽稳定性的残基，可以提高多肽稳定性。 利用基因重组技术生产多肽药物的优点在于： 1、大量生产过去难以获得的生理活性物质和多肽； 2、挖掘更多的生理活性物质和多肽； 3、改造内源生理活性物质； 4、可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。 DNA重组技术与多肽药物 DNA重组技术在多肽药物的应用 利用转基因动，植物生产多肽类药物 利用微生物生产多肽类药物 噬菌体展示技术 1、利用转基因动、植物生产多肽类药物 现代重组DNA技术特别是基因显微注射技术的发展,奠定了转基因动、植物发展的基础。 近年不少研究者从事转基因动物乳腺生物反应器生产基因工程药物的研究。 基本原理 应用重组DNA 技术和转基因技术,将目的基因转移到尚处于原核阶段(或1～2 细胞的受精卵) 的动物胚胎中,经胚胎移植,得到转基因乳腺表达的个体,在泌乳期药用蛋白质基因表达, 从动物乳汁可获得基因工程药物。利用转基因动物乳腺作为生物反应器, 生产基因工程人类蛋白质药物, 其成本较微生物发酵、动物细胞培养生产基因工程药物大大降低, 故动物乳腺生物反应器(Mammary gland bioreactor)是利用转基因动物的乳腺组织生产基因工程人类药用蛋白。 1、利用基因工程生产动、植物生产多肽类药物 动物类 1、在国外，首批转基因动物乳腺表达产品是抗凝血酶Ⅲ（AT-III) 、抗胰蛋白酶（AAT ) 、葡萄糖苷酶、蛋白C、乳转铁蛋白以及第八因子(F-Ⅷ) 等，其表达水平分别为6g/L、35g/L、10g/L、1g/L、3．5g/L和3g/L，受体动物分别为山羊、绵羊、家兔、猪、奶牛和猪，这些都是血源产品。随着此项研究的不断深入，乳腺表达产品从小分子肽到大分子蛋白质，从分泌型蛋白到内膜蛋白、多聚蛋白和二价抗体多种蛋白质。 α-1抗胰蛋白酶基因定位于转基因绵羊的乳腺组织中,可以随乳汁分泌α-1抗胰蛋白酶,产量达35 g /L乳汁,其生物活性与天然蛋白完全一样。 2、利用基因工程生产动、植物生产多肽类药物 2、红细胞生成素是一种由肾脏产生的作用于骨髓的造血相关细胞因子.它可以缩短原始红细胞的成熟期,调节骨髓中的造血细胞含量.可用于肾功能不全引起的贫血,放射化疗引起的贫血,以及其他一些罕见的贫血症的治疗.此外,还可用于外科手术前准备自体输血的病人.红细胞生成素是一种糖肽,糖基化对它的功能至关重要,因此不能在大肠杆菌等原核细胞中表达.目前,采用的方法是在培养的哺乳动物细胞中表达,因而成本很高,生产过程比较复杂.尽管如此,它上市后产值仍高达每年12.25亿美元,居多种重组药物之首。 植物类 1、美国的科学家用重组DNA烟草成功地生产出单克隆抗体,每亩烟草可表达45 g单抗。 2、ZMapp是利用烟草细胞生产的三种鼠源单克隆抗体的混合药物，对埃博拉病毒外糖标记的蛋白提供人工免疫应答。ZMapp采用烟草作为生物反应器，通过瞬时表达方式在烟草叶片生产单克隆抗体蛋白，经感染后大约一周，收获叶片来生产治疗埃博拉病毒的药物。 3、在中国，利用水稻胚乳细胞作为植物生物反应器表达的植物源重组人血清白蛋白OsrHSA已通过临床前试验。结果表明与市售制剂对照品血浆来源的人血清白蛋白相比，植物源重组人血清白蛋白对大鼠和灵长目食蟹猴的毒理学反应与药物代谢动力学均无显著差别，部分指标甚至优于血浆来源的人血清白蛋白。制造商武汉禾元生物科技有限公司利用水稻表达各种重组医药用蛋白质和小分子多肽，并已成功实现了规模化和产业化。 2、利用微生物生产多肽药物 利用微生物发酵、动物细胞培养是目前工业化生