Candidabiofilmsandtheirroleininfection浅析.pptxVIP

Candida biofilms and their role in infection假丝酵母（念珠菌）生物膜在感染中的作用 主要内容 基本概念 研究模型 生物薄膜的超微结构 生物薄膜与耐药性 生物薄膜可能的耐药机制 混合型生物薄膜 展望 基本概念 什么是生物薄膜/细菌生物膜？ 生物薄膜是指细菌粘附于接触表面，分泌多糖基质、纤维蛋白、脂质蛋白等，将其自身包绕其中而形成的大量细菌聚集膜样物。多糖基质通常是指多糖蛋白复合物，也包括由周边沉淀的有机物和无机物等。 什么是假丝酵母/念珠菌？ 念珠菌是真菌中最常见的条件致病菌，寄生于人的皮肤、口腔、阴道和肠粘膜等处，当机体免疫机能低下或正常寄居部位的微生态环境失调时，可以引起皮肤粘膜浅层或全身系统性感染。 研究模型 研究模型 导管盘系统 从导管切割下小圆片，使菌落贴壁生长。菌落增长的通过四唑鎓盐比色法或者3H亮氨酸的掺入来测定。快速处理大量样品时，可以将生物薄膜种植在96孔微量滴定板上，用于生物薄膜对抗真菌药物的敏感性的高通量测定。 研究模型 灌注生物薄膜发酵罐 生物薄膜的超微结构 生物薄膜的超微结构 生物薄膜的超微结构 生物薄膜的超微结构 结构 生物薄膜由两个不同的层组成：薄的紧密的酵母细胞层和覆盖其上的，厚而松散的菌丝层。3-D结构为附着在基质上的小菌落，通常被称为“塔形结构”或“蘑菇筏结构”。小菌落被水通道分隔开，提示了生物薄膜的养分循环机制。 成分 生物被膜的基质聚合物主要由胞外多糖组成，还存在少量的蛋白质、核酸和其他形成分。然而，有许多生物薄膜基质的（高达97％）是水。白色念珠菌生物薄膜的双层结构均含有碳水化合物，蛋白质，磷和氨基己糖，但基质中含有的碳水化合物（41%）和蛋白质（5%）明显较少。 生物薄膜的超微结构 生物薄膜与耐药性 用导管盘系统测定抑制50％代谢活性（通过四唑盐下降或[3H]亮氨酸掺入测定）时的药物浓度，对临床上重要的抗真菌药物——两性霉素B，氟康唑，氟胞嘧啶，伊曲康唑和酮康唑进行了测试。 结果： 白色念珠菌对所有这些药物的敏感度大大小于悬浮细胞。生物薄膜所需抑制50％代谢活性的药物浓度分别为5?8倍于悬浮细胞，并比相应的最小抑菌浓度（MIC）高30-2000倍。扫描电子显微镜显示，生物薄膜结构11倍于最低抑菌浓度的两性霉素B中保持不变。 生物薄膜可能的耐药机制 1、抗菌药物渗透障碍 生物薄膜中的胞外基质及不溶性胞外多糖等物质构成的生物薄膜独特三维结构，形成物理性阻碍，降低了菌体内抗菌药物的浓度。 2、微环境 生物薄膜中细胞生长速度较悬浮细胞明显缓慢。深层的细胞代谢活性很低，处于休眠状态，不进行频繁的细胞分裂，对各种理化刺激、应激反应及药物均不敏感。待抗生素治疗停止后，残存细菌利用死亡细菌作为营养源迅速繁殖形成新的生物膜，这使感染反复发作。 3、生物膜表型 对生长表面的粘附触发了部分细菌亚群基因表达的变化，诱发抗药性。 白色念珠菌中编码外排泵的MDR 基因和耐药性相关基因CDR 基因家族, 在生物膜中表达增强, 可能引起细胞膜上外排泵数目增多或活性增强。 生物薄膜可能的耐药机制 4、细菌感应系统QS 细胞通过各种信号传导系统对微环境、群体密度进行感知与交流，调节自身的基因表达，促使其黏附、聚集、形成完整的生物膜；当生物膜内的细菌数量过多时，QS会使一部分细菌从生物膜表面脱离，导致感染扩散或复发。 5、对抗机体免疫防御体制 ①细菌生物膜的屏蔽作用：基质包裹细胞形成物理屏障，可以将细胞和机体免疫系统隔开，使吞噬细胞和杀伤细胞及其所分泌的酶不能对细菌产生有效的攻击。 ②减少细胞因子的产生或酶解细胞因子。 ③免疫复合物效应：刺激机体产生大量的特异性抗体，但这些抗体与可溶性抗原结合形成免疫复合物，沉积在感染病灶周围，吸引大量中性粒细胞浸润并释放蛋白水解酶，从而引起宿主严重的免疫损害，但无法对生物膜中的细菌起作用。 混合型生物薄膜 金合欢醇是白念珠菌悬浮培养物中的群体感应分子，可组织酵母细胞向菌丝体的转化。混合生物生物膜的细胞间信息传输中扮演中演角色。金合欢醇及其他念珠菌生物膜中的信号分子通路还没有被建立起来。 展望 针对生物薄膜的新型抗生素 耐药菌快速检测 谢谢观看 QA