生物化学实验习题及参考答案.docVIP

生物化学实验习题及解答 一、名词解释 1、pI：指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值，用符号pI表示DNA变性DNA双链解链，分离成两条单链的现象。既DNA由单链复性、变成双链结构的过程。来源相同的DNA单链经退火后完全恢复双链结构的过程，同源DNA之间`DNA和RNA之间，退火后形成杂交分子增色效应当双螺旋DNA熔解（解链）时，260nm处紫外吸收增加的现象。移液枪在每次实验后应将刻度调至，让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命严使用离心机时如有噪音或机身振动时，应立即离心管须对称放入套管中，防止机身振动，若只有一支样品管另外一支要用代替。在分光光度计的使用或检定中的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。的误差越大测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性紫外分光光度法测定核酸含量的原理。 答 ：核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光，RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。一般在260nm波长下，每1ml含1μg RNA溶液的光吸收值为0.022~0.024，每1m1含1μg DNA溶液的光吸收值约为0.020，故测定未知浓度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便，迅速。若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质，则测光误差较大，故应设法事先除去。 2、沉淀可以是由蛋白质变性从而产生沉淀，也可以是由于盐析。 蛋白质变性是指光照，热，有机溶济以及一些变性剂（如重金属盐）的作用时蛋白质的空间结构被破坏，使得蛋白质丧失活性，该过程不可逆。 盐析是指向蛋白质的溶液中加入轻金属盐，使得蛋白质沉淀析出，这是由于加入盐降低了蛋白质得溶解度而析出，该过程可逆，加水蛋白质又会溶解。 二者本质上是不同的PH到酪蛋白的等电点沉淀析出酪蛋白，然后洗涤，醇醚吸水至干燥得粉末称重，计算提取率。步骤：保温→调PH→沉淀→离心→洗涤→干燥→称量 4、试述凝胶成像系统操作时应注意的事项。 答：1）紫外凝胶照相时要防止EB污染仪器，在紫外透射灯样品台上垫上蓝色和白色胶片，开关凝胶成像系统前面板那、操作GeneSnap软件之时都不可以戴手套。白光透射光源放置在紫外透射光源上面时要把蓝色和白色胶片取出。注意开机顺序，先开凝胶成像系统，再打开电脑进入GeneSnap软件。在使用紫外光源照相的过程中，不可以打开凝胶成像系统前面板。蛋白质和核苷酸等用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）使蛋白质变性，RNA通过RNase消化清除。 6、体液血糖测定有哪些方法？ 答：测定血糖的方法常用的有三种：静脉血浆葡萄糖（VPG），毛细血管全血葡萄糖（CBG）和静脉全血葡萄糖（VBG）。 1） DNA的分子大小及构型 ?8 ^不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA（covalently closed circular，cccDNA）直线DNA开环的双链环状DNA2）琼脂糖浓度一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。 t, j6 G??h/ [4 G9 N Y3DNA分子的构象 ：当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA移动最慢。 + ^* V$ u! W9 a2 z; z4电源电压 ：琼脂糖凝胶分离大分子DNA实验条件的研究结果表明，在低浓度、低电压下，分离效果较好。: T9 D3 Y$ o) A! w: @ D0 ?4 [( R5 嵌入染料的存在 ：荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA，使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降低15％。/ @6 N7 L5 m# B??]6离子强度影响 ：电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。G-250法测定蛋白质含量的原理是什么？ 答：考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）染料，在游离状态下溶液呈棕红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色。蛋白质含量在0~1000μg范围内，蛋白质-色素结合物在595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用比色法进行定量分析。考马斯亮蓝G-250法（Bradford法）是比色法与色素法相结合的复合方法，简便快捷，灵敏度高，稳定性好，是一种较好的蛋白质常用分析方法。 10、何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？ 答：Rf为氨基酸的比移值。影响纸层析迁移率Rf值的主要因素：1、样品本身的性质和结构